作者：劉 娜（哈爾濱鐵路疾病預防控制中心微生物檢驗科）

1 前 言

隨著國家經(jīng)濟水平的不斷提高，國家正在進行快速穩(wěn)定的發(fā)展，現(xiàn)代化建設(shè)是我國現(xiàn)階段重要的發(fā)展內(nèi)容。藥品微生物檢驗是我國藥品生產(chǎn)部門十分重視的一項內(nèi)容，只有準確有效的檢驗出藥品微生物含量才能對其質(zhì)量進行較好的控制。進行藥品微生物檢驗過程中需要一定的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的種類以及培養(yǎng)條件對于檢驗效果產(chǎn)生直接的影響作用，所以只有對各種檢驗培養(yǎng)基進行較好的掌握與了解，才能針對不同微生物進行正確的培養(yǎng)基選擇。

2 儀器設(shè)備、實驗器材與材料

2.1 儀器設(shè)備：KB240型低溫培養(yǎng)箱；電熱恒溫培養(yǎng)箱；AC2－4S1型生物安全柜；LMQ.C型壓力蒸汽滅菌器；TE212－L電子天平。

2.2 實驗器材：培養(yǎng)皿；三角瓶；移液器；試管；紗布；吸管；燒杯等。

2.3 材料?

試藥：幾種常見的藥品微生物檢驗培養(yǎng)基；對照培養(yǎng)基；pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液、聚山梨酯80。?

菌種：金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、黑曲霉、白色念珠菌、生孢梭菌。?

培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)、R2A培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基。

3 方 法

3.1 菌液的制備

金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌需要接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基進行生長繁殖，其培養(yǎng)溫度為30～35℃，進行18～24h的培養(yǎng)可以使細菌達到穩(wěn)定生長期，此時細菌的數(shù)量達到較多狀態(tài)。得到的培養(yǎng)物用pH7.0氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成每1mL含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液，儲存?zhèn)溆谩?/p>

培養(yǎng)黑曲霉與白色念珠菌的培養(yǎng)基一般用馬丁瓊脂培養(yǎng)基，但是兩者不同之處為培養(yǎng)黑曲霉需要對馬丁瓊脂培養(yǎng)基進行一定的改良，馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基是其能夠進行最適生長的培養(yǎng)基。黑曲霉的培養(yǎng)溫度為20～25℃，經(jīng)過5～7d的培養(yǎng)后，在馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物加入含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的無菌pH7.0氯化鈉－蛋白胨緩沖溶液，此過程的主要目的是將黑曲霉的孢子洗脫。隨后用帶有無菌紗布的無菌毛細吸管吸出孢子懸液，此過程要注意除去孢子中混有的菌絲，將孢子懸液移至無菌試管內(nèi)，并進一步用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的無菌pH7.0氯化鈉－蛋白胨緩沖溶液制成每lmL含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液，儲存?zhèn)溆谩０咨钪榫呐囵B(yǎng)溫度為20～25℃，經(jīng)過2～3d的培養(yǎng)使細菌數(shù)量達到較高水平。將馬丁瓊脂培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物用pH7.0氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成每1mL含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液，儲存?zhèn)溆谩?

生孢梭菌在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基能夠進行較好的生長繁殖，其最適培養(yǎng)溫度為30～35℃，經(jīng)過24～48h的培養(yǎng)使細菌數(shù)量達到較高水平。隨后將硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物用pH7.0氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成每1mL含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液，儲存?zhèn)溆谩?/p>

3.2 培養(yǎng)基的配制與檢驗

按照相應培養(yǎng)基配制方法與標準對本研究中所需要的培養(yǎng)基進行配制，隨機各抽取3瓶培養(yǎng)基，按照《中國藥典》2010年版中的規(guī)定方法進行培養(yǎng)基適用性的檢驗，每種培養(yǎng)基進行三個獨立試驗的重復。

3.3 培養(yǎng)基的滅菌

將配制好的培養(yǎng)基要進行及時的滅菌，將其裝入壓力蒸汽滅菌鍋中進行濕熱滅菌，常用的滅菌程序是121℃，20min，根據(jù)不同的需求在滅菌后對培養(yǎng)基的pH值進行測定。

4 結(jié) 果

經(jīng)過《中國藥典》2010版規(guī)定的培養(yǎng)基適用性檢驗，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)、R2A培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基均達到相應合格標準。

5 結(jié) 語

在進行藥品生產(chǎn)的過程中，由于相關(guān)生產(chǎn)條件的限制，不能保證藥品中微生物的數(shù)量為零，所以使藥品在一定期限內(nèi)易生長不同的微生物。藥品是質(zhì)量標準十分嚴格，其質(zhì)量直接影響到使用者的生命安全，所以我國藥品生產(chǎn)部門在現(xiàn)階段的發(fā)展中對于藥品質(zhì)量管理與控制十分重視，其主要體現(xiàn)在藥品微生物檢驗工作中。藥品微生物檢驗對所用培養(yǎng)基的要求較高，合理選擇培養(yǎng)基種類保證檢驗準確率的重要前提。培養(yǎng)基中的不同成分在微生物生長過程中起到不同的作用，所以根據(jù)培養(yǎng)基的差異可以較好的檢驗出藥品中的不同種類微生物。本研究所選取的幾種培養(yǎng)基在藥品微生物檢驗中較為常見，在未來的發(fā)展過程中對這些培養(yǎng)基進行合理的完善與改進也能較好的增強微生物的檢驗效果，使藥品種微生物的含量更有效的檢出。相信經(jīng)過我國藥品生產(chǎn)部門的未來努力，在進行藥品微生物檢驗中使用的培養(yǎng)基更為穩(wěn)定有效，進而促進國家藥品質(zhì)量水平的提高，使我國國民的生命健康得到較好保障。

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