GoldView,區(qū)分單雙鏈DNA染料
Goldview 是BIOFOUNT 推出的一款可以替代溴化乙錠(EB)的新的核酸染料產(chǎn)品,在采用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 過程中,Goldview 與 DNA可以發(fā)生結(jié)合后會(huì)產(chǎn)生比較強(qiáng)的熒光,其熒光靈敏度與 EB 差不多,Goldview 的使用方法與EB 基本相同。在紫外透射光條件下,雙鏈DNA 會(huì)呈現(xiàn)出綠色熒光,而單鏈DNA 會(huì)呈現(xiàn)出紅色熒光。Goldview非常適合大片段(>1 kb)的?DNA檢測(cè),其具有靈敏度高的特點(diǎn)。當(dāng)然也可用于 RNA染色。
Goldview?使用方法
1. 將100ml?瓊脂糖凝膠溶液(濃度一般為0.8%-2%)在微波爐中融化。
2. 加入 5-10 μl 的Goldview(若背景過高可以適當(dāng)減少用量;若靈敏度過低,可以適當(dāng)增加用量),輕輕搖勻,避免產(chǎn)生氣泡。
3. 冷卻至不燙手時(shí)倒膠,待瓊脂糖凝膠完全凝固后上樣電泳。
4. 電泳完畢,使用凝膠成像系統(tǒng)或可見光透射儀觀測(cè)。
備注:若使用凝膠成像系統(tǒng)照相時(shí),通過調(diào)節(jié)光圈、曝光時(shí)間選擇合適的濾光片,可得到成像清晰、背景較低的照片。
Goldview 注意事項(xiàng)
1. 膠厚度不宜超過0.5cm,膠太厚會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。
2. 加入 Goldview 的瓊脂糖凝膠反復(fù)融化可能會(huì)對(duì)核酸檢測(cè)的靈敏度產(chǎn)生一定影響。
3. Goldview 特別適用于大片段(>1 kb)DNA的檢測(cè)。對(duì)于更小片段的DNA,特別是<500bp檢測(cè)信號(hào)可能很弱或者無信號(hào)。對(duì)于<500bp的DNA染色,建議使用SYBR Green I 核酸染料。
4. 含 Goldview 的凝膠不適合進(jìn)行膠回收實(shí)驗(yàn)。
5. Goldview 的主要成分是吖啶橙,具有細(xì)胞滲透性,有一定的細(xì)胞毒性。建議操作人員使用時(shí)做好防護(hù)措施,帶上手套和口罩。并妥善處理好廢棄物。
6. 公司可提供無毒的 EB替代物, gelred:
案例:
GoldView staining of the samples . Samples with the fluorescence change from orange to green under UV lamp at a 254 nm are considered as positive (Lanes 2 and 3), while a sample with fluorescence change from orange to red is considered as negative (Lane 1).?