1 目的

檢測(cè)生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo)，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控，達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，以控制食品成品的質(zhì)量。

2 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)操作程序規(guī)定了生產(chǎn)環(huán)境中微生物的檢測(cè)流程及參考依據(jù)。

3 參考標(biāo)準(zhǔn)

空氣沉降菌參考標(biāo)準(zhǔn)：GBT 16294-2010?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法??

食品接觸面參考標(biāo)準(zhǔn)：GB 15979-2002?一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 中附錄E 生產(chǎn)環(huán)境采樣與測(cè)試方法

限值要求參考標(biāo)準(zhǔn)：
???DBS 43/007-2018 米粉生產(chǎn)衛(wèi)生規(guī)范 附錄A 米粉生產(chǎn)過程微生物監(jiān)控要
???DBS 43/008-2018 濕面生產(chǎn)衛(wèi)生規(guī)范 附錄A 濕面加工過程微生物監(jiān)控要求
???DBS 43/009-2018 氣調(diào)包裝醬鹵肉制品生產(chǎn)衛(wèi)生規(guī)范 附錄A 氣調(diào)包裝醬鹵肉制品加工過程微生物監(jiān)控要求

4 空間沉降菌的檢測(cè)

4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

4.1.1 生產(chǎn)企業(yè)提供的文件
—— 高壓滅菌鍋
——?恒溫干燥箱
——?電熱恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃
——?平板計(jì)數(shù)瓊脂
——?培養(yǎng)皿：f90mm
——?75%酒精
——?取樣支撐架：高度約1m（可用桌面代替）

4.1.2 產(chǎn)品的交貨驗(yàn)收
對(duì)每批產(chǎn)品，應(yīng)記錄接收日期，并檢查：
——?產(chǎn)品合格證明；
——?包裝的完整性；
——?產(chǎn)品的有效期；
——?文件的提供。

4.2.取樣點(diǎn)的確定

室內(nèi)面積不超過30 m2，在對(duì)角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1 m；

室內(nèi)面積超過30 m2，設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn)，周圍4點(diǎn)距墻1 m;

4.3?平皿的準(zhǔn)備

——?按取樣點(diǎn)數(shù)量準(zhǔn)備好培養(yǎng)皿及平板計(jì)數(shù)瓊脂，放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌；

——?滅菌后取出培養(yǎng)皿放入恒溫干燥箱內(nèi)烘干，冷卻后備用；

——?在超凈工作臺(tái)內(nèi)將每個(gè)培養(yǎng)皿中加入15~20mL的培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基凝固后方可取樣。

4.4?采樣

檢驗(yàn)員采樣前，首先對(duì)雙手用酒精消毒。再對(duì)平皿表面消毒。

注意：噴灑酒精時(shí)，培養(yǎng)皿需要密閉，不得使酒精進(jìn)入培養(yǎng)皿內(nèi)部。

采樣時(shí)，將含平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板置采樣點(diǎn)（距離地面約1m高度），并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露X min（靜態(tài)大于30分鐘，動(dòng)態(tài)不高于4小時(shí)）;

4.5?培養(yǎng)

——?將已采集樣品的培養(yǎng)基平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。

——?同時(shí)做空白試驗(yàn)。

分別從初始和最終制備的培養(yǎng)基中抽取或制備至少一個(gè)（或1%）平板或試管，置相同條件下培養(yǎng)。

4.6?計(jì)數(shù)

根據(jù)GB/T 16294 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法：

直接計(jì)算各平皿的平均值

單位：CFU/皿

參考：

——?奶粉廠?≤?100 CFU/4h(φ90mm)

——?水廠?≤?0.75 CFU/30min(φ90mm)(10個(gè)檢測(cè)點(diǎn)）

——?米粉企業(yè)?≤?30CFU/皿

——?濕面企業(yè)?≤ 300CFU/皿

——?氣調(diào)包裝醬鹵肉企業(yè)?≤?300CFU/皿/30min

5 食品接觸面微生物涂抹實(shí)驗(yàn)

5.1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

——?高壓滅菌鍋

——?恒溫干燥箱

——?電熱恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃

——?培養(yǎng)基：菌落總數(shù)----平板計(jì)數(shù)瓊脂????大腸菌群----乳糖膽鹽發(fā)酵管（雙料）

——?培養(yǎng)皿：f90mm

——?75%酒精

——?0.85%生理鹽水

——?醫(yī)用棉簽

——?藍(lán)蓋瓶：250ml

5.2 取樣前的準(zhǔn)備

按下表準(zhǔn)備物品，并滅菌備用

5.3 取樣

——?檢驗(yàn)員采樣前，首先對(duì)自己的雙手用酒精消毒；

——?藍(lán)蓋瓶開蓋前需用酒精對(duì)其表面消毒。

——?樣品采集

工作臺(tái)面：用浸濕生理鹽水的棉簽在待測(cè)物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）來回涂擦10次，共計(jì)粘貼25cm2?的面積；

人員手部：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次；

注：

1.可采用多個(gè)棉簽擦拭同一部位，擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，保證擦拭的準(zhǔn)確性。

2.剪去（或折斷）手接觸部分棉棒，將棉簽放至裝有10ml生理鹽水試管中，充分震蕩

5.4?采樣注意事項(xiàng)

——?棉簽在涂抹時(shí)，棉簽保持濕潤而無液體成滴滴下；

——?對(duì)每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在采樣點(diǎn)的具體位置、擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間；

——?采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于0～4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24h；

——?清潔消毒或加工前后各取一份樣品，對(duì)衛(wèi)生管理的評(píng)估更合適。

5.5 培養(yǎng)

——?如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，吸取1mL原液加9mL無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：10稀釋液。

——?菌落總數(shù)

以無菌操作，選擇1～2個(gè)稀釋度各取1mL樣液分別注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15mL，充分混合。

同時(shí)做空白試驗(yàn)。

待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)。

——?大腸菌群

以無菌操作，取樣液10mL接種到雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h。

?

5.6：結(jié)果報(bào)告

——?菌落總數(shù)

Y1--工作臺(tái)面細(xì)菌菌落總數(shù)，?單位：CFU/cm2

Y2--人員手部細(xì)菌菌落總數(shù), ?單位：CFU/手

A--適宜計(jì)數(shù)稀釋度平板上平均細(xì)菌菌落數(shù)

K--稀釋倍數(shù)

S--采樣面積(25cm2)

結(jié)果保留整數(shù)

?

——?大腸菌群

如乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)氣，則報(bào)告為大腸菌群陰性；

如乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)氣，則接種到乳糖發(fā)酵管內(nèi)，于36&±1℃培養(yǎng)24h；

觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)氣即可報(bào)告為大腸菌群陽性

6.?限值參考

7. 本企業(yè)內(nèi)控指標(biāo)如下：

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