發(fā)展背景

現(xiàn)代免疫分析方法期初較早的形式是放射免疫分析法，但該法最大的缺陷是其帶來的放射性污染對實驗人員和環(huán)境有很大危害，因此現(xiàn)代免疫分析中采用放射性同位素作為標(biāo)記物的方法所占的比例正在迅速減少。隨著科學(xué)研究的不斷深入，多種非放射性免疫分析技術(shù)進(jìn)入了人們的視野，如熒光偏振免疫分析、酶聯(lián)免疫分析、時間分辨熒光免疫分析、生物發(fā)光分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、電化學(xué)發(fā)光免疫分析等。今天小備就給大家介紹下高通量藥物篩選神器均相時間分辨熒光-HTRF技術(shù)。

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基本原理：

HTRF(均相時間分辨熒光)是用來檢測均相體系中待測物的一種最常用的方法，是用來研究藥物靶標(biāo)的理想的平臺。這種技術(shù)結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)?和時間分辨技術(shù)(TR)。在TR-FRET實驗中，當(dāng)供體和受體相離很近時，在供體和受體之間會有熒光共振能量轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生信號。采用雙波長檢測能夠顯著減小緩沖液和培養(yǎng)基的干擾，最終的信號跟產(chǎn)物形成的量成比例。

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一、時間分辨熒光

時間分辨熒光（TRF）利用了稀土元素中鑭系元素的獨特性質(zhì)：

鑭系元素與普通熒光相比，其半衰期更長，比普通的熒光物質(zhì)半衰期長5或6個數(shù)量級，因而可用時間分辨熒光檢測儀在激發(fā)后延遲一定時間后再測量，有效避免了非特異性熒光的干擾（圖1）。同時檢測波長和時間兩個參數(shù)進(jìn)行信號分辨，可有效排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。

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二、熒光共振能量轉(zhuǎn)移

熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)利用了兩種熒光基團(tuán)的能量轉(zhuǎn)移：能量供體和能量受體。供體被外來光源激發(fā)（例如氙燈或激光)，如果它與受體比較接近，可以將能量共振轉(zhuǎn)移到受體上，使其受到激發(fā)，發(fā)出特定波長的發(fā)射光（圖2）。如果將供體和受體分別與相互作用的兩個生物分子結(jié)合，那么生物分子的結(jié)合可以將供體和受體拉到足夠近的距離，從而產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移。

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HTRf是目前應(yīng)用較廣泛的技術(shù)，應(yīng)用在GPCRs配體結(jié)合、細(xì)胞水平的蛋白激酶實驗、蛋白磷酸化、生物治療藥物研發(fā)、蛋白互作、生物因子或者趨化因子等研究領(lǐng)域。

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HTRF實驗技術(shù)特點

1、與其他實驗相比節(jié)約時間：不需要清洗流程

2、適用于小分子和大分子復(fù)合物的互做；

3、適用于低到高親和力的相互作用；

4、信號穩(wěn)定：實驗靈敏度和重復(fù)性高于ELISA和WB；

5、可批量進(jìn)行實驗。

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HTRF技術(shù)在激酶中的應(yīng)用：

一、絲蘇氨酸激酶（STK）和酪氨酸激酶（TK）

樂備實酪氨酸HTRF技術(shù)服務(wù)平臺適用于所有酪氨酸激酶的檢測，試劑盒提供生物素標(biāo)記的底物、Eu標(biāo)記的磷酸化位點特異性抗體、XL665標(biāo)記的親和素以及緩沖液。激酶將底物磷酸化，Eu-Ab識別磷酸化底物，XL665-SA與底物上的生物素結(jié)合。Eu與XL665接近，產(chǎn)生HTRF信號。

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STK激酶活性檢測檢測服務(wù)

貨號

品名

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LX-62ST1PEB

絲蘇氨酸激酶HTRF檢測服務(wù)S1

詢價

LX-62ST2PEB

絲蘇氨酸激酶HTRF檢測服務(wù)S2

詢價

LX-62ST3PEB

絲蘇氨酸激酶HTRF檢測服務(wù)S3

詢價

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二、周期蛋白依賴性激酶（CDKs）

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貨號

品名

價格

LX-63ADK000CB13PEG

周期蛋白依賴性激酶（CDK 9）HTRF檢測服務(wù)

詢價

LX-63ADK000CB12PEG

周期蛋白依賴性激酶（CDK2/5）HTRF檢測服務(wù)

詢價

LX-63ADK000CB11PEG

周期蛋白依賴性激酶（CDK 1 4 6 7 12）HTRF檢測服務(wù)

詢價

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三、非活性的激酶的抑制劑篩選

樂備實非活性的激酶的抑制劑篩選技術(shù)適用于活性低和非活性狀態(tài)的激酶結(jié)合實驗。基于HTRF技術(shù)原理，提供標(biāo)記熒光供體的標(biāo)簽抗體（GST/His/Biotin）和三種標(biāo)記熒光的激酶配體，可覆蓋80%的激酶種類，采用競爭法檢測模型，可檢測待測物與激酶的特異性結(jié)合、藥效學(xué)和動力學(xué)。試劑盒同樣適用于靶蛋白是激酶的PROTAC小分子的研究。

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品名

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LX-62KBD01PEA

GST?非活性激酶HTRF檢測服務(wù)

詢價

LX-62KBD02PEA

6HIS?非活性激酶HTRF檢測服務(wù)

詢價

LX-62KBD03PEA

Biotin?非活性激酶HTRF檢測服務(wù)

詢價

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LabEx一站式HTRF檢測服務(wù)解決方案

1、 激酶：已驗證激酶列表200+種；

2、 激酶抑制劑篩選—均相時間分辨熒光（HTRF）技術(shù)，化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)；

3、 細(xì)胞水平激酶檢測；

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LabEx作為多因子及組學(xué)服務(wù)專家，緊跟全球各種前沿免疫技術(shù)前進(jìn)步伐，與多個前沿平臺緊密合作，不斷發(fā)掘蛋白質(zhì)定量檢測技術(shù)的靈敏度和多重分析檢測極限，始終致力于為您的研究需要，提供最好的免疫分析技術(shù)與產(chǎn)品。現(xiàn)有全面包含蛋白、基因、細(xì)胞、組織水平的 PCR Array、ELISA、HTRF、MSD、Luminex、CBA、抗體芯片、流式、免疫組化等多個技術(shù)平臺。通過線下和線上的方式為超過2000家客戶提供服務(wù)，年檢測樣本超25萬！

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