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? ? ? ?癌癥研究是一個科學探究領域，一種特別難以治療的癌癥是肺癌。肺部腫瘤學是全球癌癥相關死亡的主要原因之一，研究人員一直在努力尋找診斷，治療和預防這種疾病的新方法。肺癌是男性和女性癌癥死亡的主要原因，該疾病的五年生存率低于20%。A549細胞系是一種廣泛使用的人肺腺癌細胞系，來源于原發(fā)性肺腫瘤。A549細胞具有高度增殖性，現已被用于各種研究應用。

一、什么是A549細胞

? ? ? ?A549細胞又稱為肺癌人類肺泡基底上皮細胞，最早是在1972年由D.J.Giard等人通過一位58歲的白人男性的外植體腫瘤，轉移并培養(yǎng)肺腫瘤組織而得到的。

? ? ? ?在自然界中，這些細胞是鱗狀的，它們可以通過肺泡擴散傳播一些物質，如水和電解質。如果將A549細胞體外培養(yǎng)，它們會成長為單層細胞，附著或緊貼在培養(yǎng)瓶上。人肺泡上皮細胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。

? ? ? ?這些細胞的另一個特點是他們能夠合成卵磷脂，并且含有高度不飽和的脂肪酸，這對于維持細胞膜磷脂有重要意義。?

二、A549細胞的形態(tài)和特征

? ? ? ?多年來，A549細胞已經得到了很好的表征，對于經常將它們用作體外和體內模型的研究人員來說很有價值。A549細胞是上皮細胞，在體外作為單層粘附生長，并作為合適的轉染宿主。這也意味著它們是排列在器官和組織表面的細胞。A549腺癌細胞在營養(yǎng)豐富的DMEM培養(yǎng)基中的實驗室中生長。當它們以這種方式生長時，它們形成單層細胞。A549細胞成為肺癌研究模型的黃金標準，現在常用于細胞培養(yǎng)研究，作為研究人類肺癌的模型。

三、A549細胞培養(yǎng)方案

1）?用0.05%-0.25%的胰蛋白酶與0.53 mm EDTA沖洗細胞；

2）?在T75燒瓶中，向燒瓶中加入2mL胰蛋白酶-EDTA，并在倒置顯微鏡下觀察細胞層脫離。脫落應在3-10分鐘內發(fā)生。在此過程中不要攪動細胞，因為攪動細胞的話會使細胞結團簇生。如果細胞沒有脫落，則需在培養(yǎng)箱中放置5分鐘以促進分散；

3） 通過添加胰蛋白酶-EDTA四倍體積的完全培養(yǎng)基，來中和胰蛋白酶，隨后對細胞樣品進行離心，去除上清液。

4） 加入6-8 mL生長培養(yǎng)基沉淀和吸出細胞，輕輕移除上清液；

5）?以適當的分離比例將細胞懸浮液等分試樣加入培養(yǎng)容器中；

6）?在 5% CO 2 中于 37°C 下孵育，將培養(yǎng)物保持在 2 x 103和 1 x 104細胞/厘米2。對細胞進行計數，以確保濃度不超過7 x 104細胞/厘米2。

? ? ? ?在整個細胞培養(yǎng)過程中，測量檢測細胞濃度的工作尤為重要，牛頓光學CytoEasy全自動高通量細胞計數儀是一款基于圖像法檢測的細胞計數儀，具有優(yōu)秀的光路系統與圖像識別系統，能夠有效的區(qū)分細胞碎片與雜質的干擾，得到非常穩(wěn)定可靠的結果。

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