CAR-T細(xì)胞治療一般流程
CAR-T細(xì)胞治療一般流程
CAR-T治療又稱嵌合抗原受體T細(xì)胞治療，是將人的T細(xì)胞經(jīng)過(guò)基因工程手段體外修飾改造后，回輸患者體內(nèi)，用于治療疾病。這是一個(gè)出現(xiàn)了很多年，但是近幾年才被改良使用到臨床上的新型細(xì)胞療法。
2017年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了2個(gè)CAR-T產(chǎn)品上市，開(kāi)創(chuàng)了CAR-T療法新紀(jì)元。Kymriah作為首個(gè)FDA批準(zhǔn)的CAR-T藥物，適應(yīng)于急性淋巴細(xì)胞性白血病。10月18日， Yescarta作為第二個(gè)FDA批準(zhǔn)的CAR-T藥物，用于治療成人復(fù)發(fā)或難性大B細(xì)胞淋巴瘤，同時(shí)也是第一個(gè)用于治療非霍奇金淋巴瘤的CAR-T 產(chǎn)品。
目前生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞療法的主要步驟包括最初分離和富集T細(xì)胞、T細(xì)胞活化、使用病毒或非病毒載體系統(tǒng)進(jìn)行CAR基因轉(zhuǎn)移、體外CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增，CAR-T細(xì)胞質(zhì)控以及最后的末端工藝和冷凍保存，整個(gè)制造周期一般需要2～4周。
CAR?-T細(xì)胞治療的一般流程
1.?分離及富集T細(xì)胞
生產(chǎn)CAR-T的第一步，是通過(guò)白細(xì)胞分離術(shù)從患者 （或同種異體的供體） 處收集外周血單核細(xì)胞 （PBMC） ；然后利用基于磁珠的技術(shù)分離出特定的T細(xì)胞亞群，如CD4+、CD8+、CD25+或CD62L+T細(xì)胞。
2.?T細(xì)胞活化
3.?CAR-T載體構(gòu)建及包裝
實(shí)現(xiàn)CAR在T細(xì)胞上的表達(dá)，是CAR-T生產(chǎn)的核心技術(shù)，這一步需要利用到載體將CAR基因?qū)隩細(xì)胞。理想的載體應(yīng)該具有較高的基因轉(zhuǎn)染效率、穩(wěn)定性好，不引起機(jī)體免疫反應(yīng)等特點(diǎn)。
目前有多種方法用于T細(xì)胞修飾，包括病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo) （如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒載體等） 及非病毒載體轉(zhuǎn)染 （轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)染、電穿孔等技術(shù)等） 。其中慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)應(yīng)用較為廣泛。
用于將CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)T細(xì)胞的LV載體，是CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過(guò)程中的關(guān)鍵原材料。LV規(guī)?；a(chǎn)的產(chǎn)能、成本、質(zhì)量等各方面都將直接影響著CAR-T產(chǎn)品最終的治療應(yīng)用。
LV生產(chǎn)的上游工藝主要包括細(xì)胞培養(yǎng) （分為懸浮/貼壁培養(yǎng)等） 和病毒包裝；下游工藝一般涉及澄清、純化、過(guò)濾、濃縮、除菌等步驟。與細(xì)胞分離步驟一樣，載體的無(wú)菌性至關(guān)重要，因?yàn)樽罱K的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)物無(wú)法通過(guò)過(guò)濾進(jìn)行滅菌。
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目前主要存在的挑戰(zhàn)包括LV成本高、收率低、活性容易喪失等。LV生產(chǎn)成本高也是CAR-T定價(jià)持高不下的一個(gè)主要原因，因此，高成本效益的LV生產(chǎn)對(duì)于滿足商業(yè)需求并平穩(wěn)過(guò)渡到臨床生產(chǎn)規(guī)模至關(guān)重要。
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4.?T細(xì)胞擴(kuò)增
體外培養(yǎng)，大量擴(kuò)增CAR-T細(xì)胞至治療所需劑量，一般為十億至百億級(jí)別。
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5.?CAR-T細(xì)胞質(zhì)控
回輸CAR-T細(xì)胞，嚴(yán)密監(jiān)護(hù)病人，觀察療效并嚴(yán)密監(jiān)測(cè)不良反應(yīng)。
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參考文獻(xiàn)：
[1] Claire, Roddie, Maeve, et al. Manufacturing chimeric antigen receptor T cells: issues and challenges.[J]. Cytotherapy, 2019.
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