確實(shí)，如果慢病毒的感染效率差，會極大影響基因調(diào)控效果，這感染的第一步就困難重重，更別提后續(xù)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)了。

小恒這就來支招，幫你避雷。

首先確認(rèn)你的細(xì)胞是否適合用慢病毒感染

雖然說慢病毒適用于大部分細(xì)胞系，例如肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等，但也有一些細(xì)胞并不適用，這需要事先查閱文獻(xiàn)，或咨詢漢恒的技術(shù)人員，也可以申請病毒的試用裝進(jìn)行測試。

第二確認(rèn)收到的病毒活性

也就是要確保慢病毒進(jìn)行了正確的存儲和稀釋。慢病毒是存儲在-80℃的，如果計(jì)劃在收到慢病毒的一周內(nèi)就使用，也可放在4°C保存；解凍病毒一定要在冰上進(jìn)行，避免反復(fù)凍融，有必要可以先進(jìn)行分裝。如果病毒存儲不當(dāng)或反復(fù)凍融會降低病毒滴度/活性，-80℃保存半年以上需要重新測滴度。

第三：維持良好的細(xì)胞狀態(tài)及感染前合適的細(xì)胞接種量

良好的細(xì)胞狀態(tài)，是一切實(shí)驗(yàn)開始的前提。如果遇到支原體或是其他污染，影響了細(xì)胞狀態(tài)，則會大大影響其感染效率。在進(jìn)行針對性的防治后再開始感染實(shí)驗(yàn)。

感染時(shí)的細(xì)胞密度過高或者過低都會影響感染效率，根據(jù)細(xì)胞增殖的速度調(diào)整細(xì)胞接種量，以保證在感染后3天左右細(xì)胞剛好快長滿培養(yǎng)皿底部為宜。

• 針對大部分細(xì)胞系：傳代周期在2~3天，感染時(shí)細(xì)胞鋪板的密度保持在30~50%左右

• 針對某些原代細(xì)胞：由于細(xì)胞增長緩慢，可以在接種時(shí)提高匯合度到70~80%左右

• 針對非分裂細(xì)胞：如神經(jīng)元細(xì)胞，接種后不再增殖，此時(shí)可以按照100%的匯合度進(jìn)行接種。
  

第四：正式感染先預(yù)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行MOI的摸索

MOI（MultiplicityofInfection，感染復(fù)數(shù)）是指每個(gè)細(xì)胞感染的病毒數(shù)，通常MOI越高，病毒整合到染色體的數(shù)量以及目的蛋白的表達(dá)量越高。

舉個(gè)例子，取MOI=3、10、30、100，根據(jù)操作說明，將換算好體積的病毒液加入細(xì)胞中。

每孔加病毒量（μl）=MOI*細(xì)胞數(shù)/滴度（TU/ml）×1000

感染3-4天后，觀察熒光表達(dá)情況，通過細(xì)胞感染效果，確認(rèn)目的細(xì)胞的感染條件和感染參數(shù)。

第五：加助轉(zhuǎn)染試劑

以上的問題都避雷了，那最簡單的方法就是可以加入助轉(zhuǎn)染試劑polybrene來提升效率。

Polybrene是帶正電的小分子，與細(xì)胞表面的陰離子結(jié)合， 通常加入polybrene能提高感染效率10~30%。但要注意Polybrene有一定的細(xì)胞毒性，有的細(xì)胞對Polybrene的毒理反應(yīng)明顯，因此細(xì)胞是否適合Polybrene需要摸索。

第六：對于一些難感染細(xì)胞的感染方法

如果你的細(xì)胞本身難以感染，例如懸浮細(xì)胞，可使用平角離心轉(zhuǎn)染法（低速（200′g）離心1h，然后放入培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)即可）。若由于實(shí)驗(yàn)條件有限，沒有平角離心機(jī)，可用離心管代替。

其他一些較難感染的細(xì)胞可進(jìn)行二次感染（即感染24h后，更換新鮮病毒進(jìn)行二次感染），可顯著提升感染效率。

以上的問題都考慮到了，小恒相信你的細(xì)胞感染一定可以達(dá)到預(yù)期。