Western Blot實驗步驟-第一天 1.配制電泳液、轉膜液（用干粉配制） 2.拆開預制膠（注意膠下方是不是有膠條要撕掉，看好說明書），將膠板安裝入電泳槽，倒?jié)M電泳液，膠板內部倒?jié)M，外側適量即可）。用移液槍將制備好的蛋白樣品注入孔道中。以如下順序加樣：marker（5 μl） 樣品（10 μl）1 2 3 4 5 6 7 8 marker（5 μl） marker（2μl) 3.將電泳槽與Power正確連接。設置電壓300V，電流50A，后續(xù)可調整為70A，電泳到蛋白條帶充分展開，Loading移到膠底時可結束電泳。

4.轉膜： 1）將多余的膠切去 2）安裝轉膜裝置：取出轉膜板，黑板朝下，依次放入海綿，濾紙，膠，NC膜（注：NC膜要提前放入甲醇活化），濾紙，海綿，要將膠與膜之間的氣泡除盡，夾緊轉膜夾，置于轉膜槽中，倒?jié)M轉膜液(轉膜夾放置時主義方向，黑對黑） 3）轉膜：將轉膜槽與Power連接，設置條件為電壓100V，1h，置于倒了冰水放了冰袋的泡沫盒里轉膜。 5.封閉：用5%脫脂奶粉封閉，用PBS配制5%脫脂奶粉，將NC膜取出來，根據(jù)要跑的蛋白先切膜，放入配制好的牛奶中，搖床上封閉1h。 6.敷一抗：按照說明書稀釋一抗，在抗體盒上做好蛋白標記，倒掉封閉液后，條帶先用PBS洗1-2次，然后敷一抗（一個孔道5ml），抗體盒放在4℃搖床過夜。 Western Blot實驗步驟-第二天 1.把抗體盒先拿出來靜置10min，配制TBST，我們實驗室是將10??的稀釋成1??的 2.二抗1:10000稀釋 3.洗條帶：用TBST洗 7min洗5次或10min洗3次 速率70

4.倒掉洗液，用槍頭吸干，敷二抗1h 5.敷二抗結束后，用TBST洗3次，一次5min速率90 6.配制顯影劑，顯影