蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定 毛細(xì)管電泳
蛋白質(zhì)表面存在一些側(cè)鏈離子基團(tuán),如氨基、羧基、酚基、巰基等酸堿性基團(tuán),因此蛋白質(zhì)和氨基酸一樣本身帶有凈電荷。在不同pH的溶液中解離所帶的正負(fù)電荷不同,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)解離的正負(fù)電荷相等時,這時的pH值就稱為蛋白的等電點(diǎn)(isoelectric point,pI)。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)與其空間結(jié)構(gòu)有關(guān),因此對于某一特定蛋白質(zhì)來說其等電點(diǎn)也是固定的。
當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于與其等電點(diǎn)相同pH的溶液中時,在該溶液中的溶解度最小,可以從溶液中沉淀出來,故蛋白質(zhì)等電點(diǎn)常用于蛋白質(zhì)的分離和提純。常用的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定方法主要有傳統(tǒng)的沉淀法、分光光度法和等電聚焦法等,基于毛細(xì)管電泳的等電聚焦法憑借其耗時短、精確度高以及樣本用量少等優(yōu)點(diǎn)已成為等電點(diǎn)測定的強(qiáng)有力工具。毛細(xì)管等電聚焦法利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時凈電荷為零的原理將待測蛋白質(zhì)在特殊的緩沖液中進(jìn)行聚丙烯凝膠電泳,這種特殊的緩沖液為兩性電解質(zhì),可以在凝膠內(nèi)形成連續(xù)的pH梯度,當(dāng)電泳完畢時,蛋白質(zhì)遷移到的位置對應(yīng)的pH就是該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。
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