常見誤解（之一）

誤認(rèn)為RNA提取一定要4度離心。離心柱提取，上離心柱也用4度離心。其實(shí)這是不對的。4度離心只有壞處，沒有好處。

常見誤解（之二）

誤認(rèn)為提取RNA/DNA不用跑電泳，只要測OD吸光值/OD比值就可以知道濃度和純度。核酸純化，大家最大的誤解，就以為測出來OD值吸光值就是測出來了核酸的濃度，這個概念是不對的。測OD值，只是測總吸光值，它不能等同于測的是真實(shí)核酸濃度?？偽庵悼梢詠碓从谡嬲暮怂幔舶瑏碓从跉埩舻碾s質(zhì)，殘留的蛋白，殘留的降解的RNA/DNA，它們都有吸光值，所以測量的總吸光值OD值換算的濃度，不代表這都是純核酸的濃度，也可能包含了來源于殘留的雜質(zhì)，降解的RNA，殘留的蛋白等等的吸光值換算的濃度。這當(dāng)然不是真正的純核酸的濃度。只有在我們提供的核酸(RNA,DNA)是100%純的時候，測量的OD值濃度才是真正能100%換算成核酸濃度。 舉個例子，我們有一個完全降解的RNA，去測量OD值吸光值，它的吸光值也會很高，機(jī)器把吸光值換算成的濃度很高，但是這個我們能用嗎？RNA已經(jīng)完全降解了，跑電泳什么也沒有。 再舉個例子，我們提取DNA完全失敗了（完全沒有提取到DNA），但是里面殘留了一堆的蛋白雜質(zhì)和降解的RNA片段,我們?nèi)y量吸光值OD值，也非常的高，機(jī)器換算成濃度也非常高。但是我們能說成功提取了DNA嗎？ 跑電泳一看，什么DNA條帶也沒有，只有前面殘留一堆降解的RNA片段。

常見誤解（之三）

誤認(rèn)為純的RNAOD260/280比值是1.8-2.1 或者誤認(rèn)純的RNA比值是1.8-2.1， 超過2.0或者2.1就降解了。這是完全誤解了， 純的RNA的OD260/280比值是2.2，比值2.1-2.2不但不一定是降解，反而可能是純度高的標(biāo)志。 只有超過2.3才提示降解（是否真正降解必須通過電泳來確

艾德萊談提取RNA常見誤解（之四）：

誤認(rèn)為RNA的OD260/230比值偏低，甚至很低的RNA質(zhì)量不行，無法用于下游實(shí)驗(yàn)。這個是一個非常流行的誤解，也是危害最大的誤解。真相是：OD260/230偏低，大部分是因?yàn)樘崛NA試劑用到的異硫氰酸胍的殘留導(dǎo)致了OD230吸光值升高從而導(dǎo)致OD260/230偏低，但是這種殘留的微量異硫氰酸胍在絕大部分情況下完全不影響下游的反轉(zhuǎn)錄/熒光定量/測序建庫等實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)證明，即使殘留0.1mM的異硫氰酸胍，也足夠被分光光度計檢測出來（導(dǎo)致OD260/230測量比值大幅度降低）。但是即使殘留100mM 異硫氰酸胍（比機(jī)器能測量出來的濃度高1000倍的殘留），也不會抑制下游的反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR。而實(shí)踐中，殘留異硫氰酸胍達(dá)到100mM的情況基本不可能，即使真出現(xiàn)了這種極端高的殘留，也不影響下游反轉(zhuǎn)錄熒光定量。所以O(shè)D260/230比值低，根本不能用于判斷RNA的質(zhì)量好壞，不能用來判斷是否可以用于下游實(shí)驗(yàn)。打個通俗的比方，一切的致癌物，脫離劑量去談致癌性都是耍流氓。乙醇是世界衛(wèi)生組織廣而告之的標(biāo)準(zhǔn)的I類致癌物， 同樣的甲醛也是I類致癌物，所有啤酒里面都有甲醛，但是你照樣會喝酒和喝啤酒。 因?yàn)槟阒溃瑯O少微量的乙醇或者微量的甲醛并不致癌。問題就在這里，RNA提取常用到的異硫氰酸胍往往都會在提取的RNA里面有微量殘留，因?yàn)榉止夤舛扔嫎O其靈敏，非常低的殘留就能導(dǎo)致OD260/230比值偏低從而被機(jī)器檢測出來。但是這個極其微量的殘留，完全不影響RNA用于下游的反轉(zhuǎn)錄熒光定量，不影響用于下游的測序建庫啊。你喝酒的時候知道脫離劑量談致癌是耍流氓，為啥你提取RNA的時候，脫離殘留的劑量去耍流氓說這個RNA不行，不能用呢？？？