單克隆抗體在生產(chǎn)及存儲過程中會由于抗體分子自身性質(zhì)、環(huán)境應力、儲存方式等因素，而發(fā)生復雜的翻譯后修飾，如氧化、脫酰胺、糖基化、C末端賴氨酸切除、N末端焦谷氨酸化、降解/聚合等，造成抗體在電荷分布方面高度的異質(zhì)性。電荷異構(gòu)體的產(chǎn)生會影響抗體藥物的結(jié)合能力、生物學活性、免疫原性以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等，進而影響抗體藥物的藥物代謝動力學、安全性和有效性。電荷變化的復雜性常常給評估完整的電荷變化概況帶來巨大的挑戰(zhàn)。

目前，有多種方式（IEX-HPLC、FFE、icIEF等）對電荷異構(gòu)體進行餾分收集，從而進一步對產(chǎn)品進行表征。奕安濟世生物藥業(yè)理化分析平臺具有成熟的IEX-HPLC餾分收集技術(shù)，可獲得較高的目標收集組分含量，餾分收集純度1（IEX-HPLC）可達85%以上。收集裝置如圖1所示，主要是由HPLC和餾分收集器串聯(lián)組成。

為提高餾分收集效率，前期一般需要在所用原始分析方法（IEX-HPLC）基礎上進行優(yōu)化，在保持主洗脫梯度程序不變的情況下，縮短方法的平衡時間，增加進樣質(zhì)量。其中，在不改變進樣器定量環(huán)體積基礎上，通過疊加多次進樣然后一次洗脫的方式以增加進樣質(zhì)量，可大大提高目標組分的收集效率。圖2展示了不同進樣質(zhì)量的CEX-HPLC色譜圖，單次進樣/洗脫的抗體質(zhì)量可達9 mg。

為了提高目標組分的收集效率，采用進樣9 mg的抗體質(zhì)量進行餾分收集，收集區(qū)域如圖2（下）所示。將盲收2得到的餾分樣品結(jié)合二次精制的方式，再經(jīng)系列換液、濃縮，最終得到的目標收集組分經(jīng)CEX-HPLC檢測圖譜如圖3所示，餾分收集純度見表1。其中第二個堿性峰的（Basic Fraction 2）由于發(fā)生N端焦谷氨酸環(huán)化，導致其收集純度降低，其余餾分收集樣品純度可達90%以上。

表1.? 餾分收集純度

餾分收集樣品的純度達到后續(xù)表征研究要求后，需對其進行儲存條件進行穩(wěn)定性評估。以確保其質(zhì)量在表征研究過程中，未發(fā)生明顯改變。餾分收集后的樣品將進一步用于表征研究，對CQA評估、工藝變更、產(chǎn)品批次間差異、質(zhì)量標準制定等具有重要的指導意義。

備注：

1：餾分收集純度是指用CEX-HPLC檢測，每個樣品對應符合餾分位置要求，所收集到餾分組分的峰面積百分比。

2：盲收是指在IEX圖譜上由于進樣量或檢測器信號過載導致組分共洗脫，無法確認待收集區(qū)域為酸、堿性峰還是主峰的情況下，對有較強檢測信號的洗脫區(qū)域進行無選擇性收集的方式。

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