單克隆抗體的制備是一項(xiàng)復(fù)雜而精細(xì)的工作，單B細(xì)胞抗體開發(fā)技術(shù)是近年來新興的單克隆抗體制備技術(shù)。它是將單細(xì)胞分離鑒定技術(shù)結(jié)合多種PCR技術(shù)形成的一種單克隆抗體體外篩選及表達(dá)體系，以單個(gè)B細(xì)胞為起始點(diǎn)，利用每個(gè)B細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，直接從單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增出抗體基因，進(jìn)而獲得抗原特異性抗體。

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B細(xì)胞單克隆抗體制備技術(shù)具有高通量、高效率、低細(xì)胞數(shù)等優(yōu)點(diǎn)，所制備的抗體保留了豐富的基因多樣性及輕重鏈可變區(qū)天然配對(duì)，是最新、最高效的抗體篩選方法之一。特別是在快速應(yīng)對(duì)病原微生物傳染病的抗體開發(fā)上有著巨大優(yōu)勢(shì)。

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使用單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)制備兔單克隆抗體其流程主要包括三個(gè)重要步驟：鑒定和分離單個(gè)B細(xì)胞、擴(kuò)增和克隆抗體基因、重組抗體的表達(dá)與鑒定以及抗體的擴(kuò)大培養(yǎng)和純化。普健生物Xten?Mab Single B 兔單克隆抗體制備無需兔骨髓瘤細(xì)胞商業(yè)化授權(quán)，采用獨(dú)特的細(xì)胞分選和富集技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了單B細(xì)胞平臺(tái)從特異性到功能性的篩選、并保證Assay結(jié)果的準(zhǔn)確度，提高總體篩選的工作效率、減少下游表達(dá)驗(yàn)證的工作量、縮短抗體發(fā)現(xiàn)的周期，為抗體藥開發(fā)節(jié)省了寶貴的時(shí)間。

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鑒定和分離單個(gè)B細(xì)胞

單個(gè)B細(xì)胞的分離通常有隨機(jī)分離和抗原特異性分離兩種。免疫兔子后獲得抗原特異性抗體濃度較高的血樣，從中分離B細(xì)胞，操作簡(jiǎn)單。方法主要有顯微操作、激光捕獲顯微切、熒光激活細(xì)胞分選法。還有一種適合于抗腫瘤抗體、自身免疫抗體等特異性抗體含量較低的抗原特異性分離方法，該方法需分離抗原特異性B細(xì)胞，方法包括：熒光標(biāo)記抗原多參數(shù)細(xì)胞分、抗原標(biāo)記磁珠分選法、微雕法、以及細(xì)胞微陣列芯片等。

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擴(kuò)增和克隆抗體基因

細(xì)胞分選時(shí)，通常需將單個(gè)B細(xì)胞分至內(nèi)含適量細(xì)胞裂解液、RNA 酶抑制劑和PCR反應(yīng)試劑的適當(dāng)容器中進(jìn)行B細(xì)胞培養(yǎng)，然后對(duì)分泌抗體檢測(cè)陽性的孔進(jìn)行進(jìn)RNA提取逆轉(zhuǎn)錄。通常采用合適的引物進(jìn)行巢式或半巢式逆轉(zhuǎn)錄 PCR (Nested or semi-nested RT-PCR)擴(kuò)增抗體可變序列。

表達(dá)、篩選和鑒定抗原特異性抗體

鑒定抗體的抗原特異性和生物活性前需將攜帶有抗體基因的表達(dá)載體在相應(yīng)系統(tǒng)中表達(dá)，如原核表達(dá)系統(tǒng)、真核表達(dá)系統(tǒng)。通過親和層析和離子交換層析純化到的抗體，也可通過免疫沉淀、控斑法、空斑減少中和測(cè)定法流式分析法、活細(xì)胞成像測(cè)定法、體內(nèi)藥物活性測(cè)定法等方法進(jìn)一步測(cè)定抗體與抗原的特異性、親和力以及中和活性保護(hù)活性等生物學(xué)特性。

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單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)由于可以直接獲得重輕鏈正確配對(duì)的抗體序列，變得越來越有吸引力，某些方面具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。但是由于該技術(shù)對(duì)設(shè)備的高度依賴性，并且對(duì)抗原標(biāo)記、引物設(shè)計(jì)的高效性和準(zhǔn)確性方面有較高要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)要求較高。普健生物新型的Xten??Mab?Single?B 兔單克隆抗體開發(fā)技術(shù)平臺(tái)利用B細(xì)胞分選富集策略，在流式分選設(shè)備的支持下，有效富集抗原特異性B細(xì)胞，提高B細(xì)胞體外培養(yǎng)的成活率，保留B細(xì)胞的多樣性，可開發(fā)出不同應(yīng)用需求的抗體。

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

1.高特異性：與小鼠和其他嚙齒動(dòng)物相比，兔免疫系統(tǒng)更優(yōu)秀，產(chǎn)生的抗體特異性更強(qiáng)，親和力更高

2.高穩(wěn)定性：與常規(guī)小鼠生產(chǎn)的單克隆抗體相比，兔IgG結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性高

3.高親和力：兔的B細(xì)胞成熟過程產(chǎn)生的親和力是嚙齒動(dòng)物的10-100倍

4.高多樣性：兔擁有豐富的B細(xì)胞反應(yīng)庫，其產(chǎn)生的抗體在表位變異、突變、構(gòu)象變化等方面優(yōu)勢(shì)顯著，且多樣性高

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案例展示

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