隨著美容護膚品市場的不斷發(fā)展，新的化妝品和美容護膚手段層出不窮，化妝品不良反應及化妝品皮膚病的發(fā)生幾率也逐年增加。國家成立了專門的監(jiān)督管理機構和診斷機構對化妝品不良反應進行監(jiān)測，并同時加強對新研發(fā)化妝品上市前安全性的評估。對一種化妝品的安全性評估主要評價其是否具有使皮膚致敏和引起過敏性接觸性皮炎的可能性。

目前評價的方法包括對產品組分結構特性的分析、文獻回顧、動物局部淋巴結試驗（LLNA）和人體試驗等。其中，人重復性損傷性斑貼試驗（Human Repeated Insult Patch Test， HRIPT）被認為是證明產品不會在人體產生不良反應的*可信方法[1]，用于對動物實驗中已經判定為無明顯不良反應水平（NOEL）的物質的確證試驗[2]。目前國內很少有報道采用HRIPT進行化妝品安全性評估。本文介紹了筆者科室近期進行的一項針對常見刺激物及11種受試產品的HRIPT試驗，對如何進行HRIPT試驗和結果判讀進行闡述。

什么是HRIPT/RIPT：

重復結果斑貼試驗是目前最嚴格的研究。使用產品或原材料后不會有潛在的刺激或過敏。使用九組誘導貼片，然后在休息一段時間后進行一組刺激試驗。

Hript：人體反復損傷斑貼試驗（Hript）

測試分為誘導期和刺激期。通過多次重復測試，我們最終可以判斷受試者是否有紅斑或其他不良刺激反應，測試通過后會被亞馬遜審核通過。

化妝品在使用時與人體表面直接接觸，如果產品存在問題，可能會引起包括皮膚不良反應。斑貼試驗作為常用的化妝品安全性測試，可以檢測這種潛在可能性，以確保化妝品使用安全性。

HRIPT/RIPT測試過程：

1、樣品到達實驗室后，將給受試物一個獨立的實驗室測試編號，并記錄批號、樣品規(guī)格、贊助商、接收日期和測試請求，并通過測試日志進行驗證。

2、志愿者篩選：根據(jù)研發(fā)人員的意見，檢測人員需無全身疾病或皮膚病病史，否則會影響檢測結果或增加不良反應風險。如果皮膚顏色適合觀察紅斑試驗，任何皮膚性質和任何種族都可以參加，最后選擇53人的研究樣本。

3、測試分為誘導期和刺激期。通過多次重復測試，我們最終可以判斷受試者是否有紅斑或其他不良刺激反應。

材料和方法：

實驗對象：

53名健康自愿受試者，其中男性6名，女性47名。受試者年齡為23～53歲（平均為34.7歲）。排除標準：①處于懷孕期、哺乳期或分娩半年內；②患有可能干擾試驗結果或增加受試者研究參加風險的急性或慢性疾病；③正在口服或外用可能干擾試驗結果的藥物（如糖皮質激素、非甾體類消炎藥、抗組胺類藥物和免疫抑制劑等）；④患有慢性過敏性皮膚病或近12個月內被診斷為皮膚腫瘤并接受治療者；⑤在斑貼部位有日曬傷、皮膚顏色不均勻、文身、痤瘡、濕疹、牛皮癬、瘢痕及其他可能會影響觀察的皮膚病受試者；⑥試驗經過北京大學第一醫(yī)院倫理委員會批準，所有受試者知情同意并簽署知情同意書。

試驗材料：

1、斑試器：封閉式斑試器：為貼附于封閉式膠帶上的8mm鋁制小碟（北京大學醫(yī)學部醫(yī)學儀器公司）；半封閉斑試器：為直徑23mm的圓形防過敏膠帶（Curad Sensitive Skin ， Beiersdorf Inc.， Wilton CT）。

2、試驗流程： 整個試驗過程分為誘導期（3周），休息期（2周）和激發(fā)期（1周）三部分，持續(xù)時間為6周。試驗過程如圖1所示。

3、誘導期：將加有受試物的斑試器用無刺激膠帶貼敷于受試者的脊柱右側，用手掌輕壓以使之均勻地貼敷于皮膚上，并用標記筆標記斑貼部位，保證誘導階段9次每個產品都是貼在相同的部位（每周一、三、五進行），如圖2所示。持續(xù)24h后，囑受試者將斑試器取下，避免搓洗局部。再間隔24h后（即下次斑貼之前，周五斑貼的為間隔48h）觀察反應。以上步驟共重復9次，持續(xù)時間為3周。

4、 休息期：在誘導期結束后休息10～14天，期間無任何處理。

結果：

1、結果判讀：HRIPT的結果是根據(jù)受試者在誘導期和激發(fā)期的皮膚反應綜合判定的。如受試者在某個樣品點上誘導期早期即發(fā)生紅斑、水腫、丘疹等反應，并在激發(fā)期再次出現(xiàn)同樣等級的反應，表明該受試者在試驗前已被該樣品致敏，記為前致敏狀態(tài)（Pre-sensitization）。如果在誘導期出現(xiàn)輕度反應（1～2分），而激發(fā)期未再現(xiàn)，為該樣品重復刺激造成的刺激反應（Irritation）；如果受試者在激發(fā)期的反應較誘導期明顯增強，表示該樣品在試驗期間誘導出這位受試者的過敏反應，提示這種產品具有潛在致敏性，記為誘導過敏（Induction of Sensitization）。

2、Henderson 和Riley 對HRIPT的結果進行過統(tǒng)計學推算，假設在樣本量為100的人群中進行HRIPT檢測，如果結果為陰性，那么在同樣情況下使用這些產品時，在人群中產生過敏反應的幾率*大不會超過2.9%[2]。需要注意的是，因為HRIPT是在增加濃度和封閉的情況下測試，實際使用時過敏率更低，根據(jù)Hall等[6]的估計，化妝品誘導出皮膚過敏的概率約為0.09%。因此，HRIPT的陰性結果可以作為確證實驗來證實化妝品的安全性。