DSPE-PEG-Cy5,影響熒光產生的因素以及熒光染料的一般參數(shù)有哪些?
DSPE-PEG-Cy5,影響熒光產生的因素以及熒光的一般參數(shù)有哪些?
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熒光(Fluorescence)是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當某種常溫物質經某種波長的入射光(通常是紫外線或可見光)照射,吸收光能后進入激發(fā)態(tài),并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光波長要長一些的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。具有這種性質的發(fā)射光就被稱之為熒光。
熒光染料的一般參數(shù):
吸收光譜、熒光激發(fā)光譜、斯托克斯位移:
吸收光譜(Absorption spectrum)。是指熒光染料分子通過吸收光能量使電子躍遷而產生的光譜,一般由紫外可見分光光度計獲得。
熒光激發(fā)光譜(Excitation spectrum)。是反映出染料對外來激發(fā)光的響應情況,在不同波長光激發(fā)下的發(fā)光情況所形成的光譜。在熒光儀中,設定染料的發(fā)射波長和夾縫寬度,通過掃描可得到激發(fā)波長和對應熒光強度的關系曲線,即為染料的激發(fā)光譜。
熒光發(fā)射光譜(Emission spectrum)。即染料受到光激發(fā)而發(fā)光,產生的光譜叫做發(fā)射光譜。其測定方式類似于激發(fā)光譜,在熒光儀中設定染料的激發(fā)波長和夾縫寬度,掃描即可得到熒光發(fā)射波長和響應熒光強度的關系曲線。
斯托克斯位移( Stokes shift)。指最大發(fā)射波長和最大吸收波長之間的差值。一般來說在進行熒光強度測定的時候,較長的斯托克斯位移能夠更好地避免儀器激發(fā)光散射干擾,而傳統(tǒng)的熒光染料特別是長波長染料幾乎都存在斯托克斯位移較小(約20 nm左右)的問題。
熒光量子產率和熒光強度:
熒光量子產率( Fluorescent quantum yield)理論上是指激發(fā)態(tài)分子中通過發(fā)射熒光而回到基態(tài)的分子占全部激發(fā)態(tài)分子的分數(shù)。
熒光強度(Fluorescence intensity)是指在一定的條件下儀器所測得的熒光物質發(fā)射熒光的大小。
熒光壽命:
當某種物質被激發(fā)光激發(fā)后,該物質的分子吸收能量后電子從基態(tài)躍遷到某一激發(fā)態(tài)上,再以輻射躍遷的形式發(fā)出熒光回到基態(tài)。當激發(fā)停止后,分子的熒光強度降低到激發(fā)時最大強度的1/e所需的時間稱為熒光壽命( Fluorescentlifetime),它表示為物質分子在激發(fā)態(tài)存在的平均時間,通常稱為激發(fā)態(tài)的熒光壽命。
影響熒光產生的因素:剛性平面結構;取代基的影響;重原子效應;溫度;溶劑的影響;pH值的影響。
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