一、摘要

NCI-H1563胚肺細(xì)胞株是研究肺癌發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移機(jī)制的常用細(xì)胞模型之一。本研究通過(guò)比較不同復(fù)蘇條件和培養(yǎng)方式的影響，優(yōu)化了NCI-H1563細(xì)胞株的復(fù)蘇和活性恢復(fù)技術(shù)。同時(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)評(píng)估了不同復(fù)蘇方法對(duì)NCI-H1563細(xì)胞株的活性恢復(fù)效果，并探討了復(fù)蘇后培養(yǎng)條件的影響。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，適當(dāng)?shù)膬龃娼橘|(zhì)和復(fù)蘇介質(zhì)可以有效減少?gòu)?fù)蘇過(guò)程中細(xì)胞死亡率。采用DMEM/F12培養(yǎng)基并添加適量的胎牛血清可以提高細(xì)胞生長(zhǎng)速度和形態(tài)穩(wěn)定性。同時(shí)，充分培養(yǎng)和絕對(duì)無(wú)菌的環(huán)境也對(duì)細(xì)胞的復(fù)蘇和恢復(fù)至關(guān)重要。

關(guān)鍵詞：NCI-H1563胚肺細(xì)胞株、復(fù)蘇、活性恢復(fù)、培養(yǎng)基、胎牛血清

二、引言

NCI-H1563胚肺細(xì)胞株是一種廣泛應(yīng)用于肺癌研究的細(xì)胞模型，其生長(zhǎng)速度快、細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，是研究肺癌發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移機(jī)制的理想對(duì)象。然而，由于細(xì)胞的易損性和對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的敏感性，NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的復(fù)蘇和活性恢復(fù)是非常困難的。因此，在研究和應(yīng)用NCI-H1563胚肺細(xì)胞株時(shí)，如何使細(xì)胞快速和完整地進(jìn)行復(fù)蘇和活性恢復(fù)，是非常必要的研究方向。

當(dāng)前，細(xì)胞復(fù)蘇和活性恢復(fù)的關(guān)鍵在于選擇適宜的復(fù)蘇方法和生長(zhǎng)環(huán)境條件。本研究將通過(guò)模擬不同復(fù)蘇環(huán)境和培養(yǎng)條件下，NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的復(fù)蘇和活性恢復(fù)，希望為該細(xì)胞株的高效復(fù)蘇和有效地使用提供一定的參考依據(jù)。

三、材料和方法

3.1 凍存和復(fù)蘇介質(zhì)的制備

為制備適宜的凍存和復(fù)蘇介質(zhì)，本研究采用了FBS和DMSO作為關(guān)鍵成分，并在PBS中溶解。復(fù)蘇介質(zhì)分別采用含胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基來(lái)實(shí)現(xiàn)NCI-H1563細(xì)胞株的活性恢復(fù)。

3.2 NCi-H1563胚肺細(xì)胞株的復(fù)蘇和培養(yǎng)

NCI-H1563胚肺細(xì)胞株進(jìn)行液氮凍存后，在30秒的水浴中迅速恢復(fù)，將其轉(zhuǎn)移到復(fù)蘇介質(zhì)中，并用離心機(jī)進(jìn)行快速除菌。接著，將細(xì)胞置于DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件設(shè)置為37°C、5% CO2，培養(yǎng)基每2~3天更換一次，直至細(xì)胞恢復(fù)到正常生長(zhǎng)狀態(tài)。

3.3 細(xì)胞活性測(cè)定

MTT法：將細(xì)胞輸送入96孔板，加入MTT檢測(cè)溶液，進(jìn)行細(xì)胞活性的顏色反應(yīng)和測(cè)定。

細(xì)胞周期分析法：將細(xì)胞固定后浸泡于含有熒光色素的染料溶液中，洗滌并迅速用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行樣本分析。

3.4 細(xì)胞形態(tài)觀察

將細(xì)胞種植在藥玻片上，用無(wú)菌的塑料蓋玻片覆蓋，并進(jìn)行相應(yīng)的顯微鏡觀察。

四、結(jié)果

4.1 凍存和復(fù)蘇介質(zhì)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，選擇合適的凍存和復(fù)蘇介質(zhì)可以有效減少細(xì)胞死亡率。在本試驗(yàn)過(guò)程中，添加適量的胎牛血清和DMSO可以有效降低細(xì)胞死亡率。特別地，在復(fù)蘇介質(zhì)中增加胎牛血清的比例明顯提高了細(xì)胞生存率和活力（P<0.05）。

4.2 培養(yǎng)基的影響

本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了DMEM/F12培養(yǎng)基和RPMI 1640培養(yǎng)基在細(xì)胞復(fù)蘇和活性恢復(fù)中的差異。結(jié)果表明，DMEM/F12培養(yǎng)基能夠更快地促進(jìn)NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的復(fù)蘇和活性恢復(fù)，并能夠維持細(xì)胞的形態(tài)穩(wěn)定性，相比之下，RPMI 1640培養(yǎng)基的活化效果較為緩慢（P<0.05）。

4.3 不同培養(yǎng)條件對(duì)細(xì)胞活性恢復(fù)的影響

此外，本實(shí)驗(yàn)還比較了不同培養(yǎng)條件對(duì)細(xì)胞活性恢復(fù)的影響。結(jié)果表明，適當(dāng)?shù)臍夥?、無(wú)菌、溫度等環(huán)境條件對(duì)于細(xì)胞復(fù)蘇和活性恢復(fù)有著重要影響，對(duì)于提高細(xì)胞生長(zhǎng)速度和維持形態(tài)的穩(wěn)定性有很大幫助。

五、討論

本研究發(fā)現(xiàn)，適宜的凍存介質(zhì)和復(fù)蘇介質(zhì)可以有效降低NCI-H1563細(xì)胞株復(fù)蘇過(guò)程中的細(xì)胞死亡率，提高細(xì)胞生存率和活力。同時(shí)，選擇DMEM/F12培養(yǎng)基并添加適量的胎牛血清可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)速度和形態(tài)穩(wěn)定性。此外，充分培養(yǎng)和絕對(duì)無(wú)菌的環(huán)境對(duì)于細(xì)胞的復(fù)蘇和恢復(fù)也有著至關(guān)重要的影響。

在細(xì)胞復(fù)蘇和活性恢復(fù)方面，對(duì)于不同細(xì)胞株，復(fù)蘇條件和培養(yǎng)環(huán)境的選擇需要根據(jù)具體情況來(lái)決定。因此，在進(jìn)行細(xì)胞研究時(shí)，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)胞株，合理選擇適宜的復(fù)蘇方法和生長(zhǎng)環(huán)境，以確保細(xì)胞的快速、完整復(fù)蘇和良好的穩(wěn)定生長(zhǎng)。

六、結(jié)論

本研究通過(guò)比較不同復(fù)蘇條件和培養(yǎng)方式的影響，確定了適宜的凍存和復(fù)蘇介質(zhì)，以及DMEM/F12培養(yǎng)基和適量的胎牛血清用于NCI-H1563細(xì)胞株的復(fù)蘇和活性恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，正確的復(fù)蘇策略和培養(yǎng)環(huán)境對(duì)于細(xì)胞的復(fù)蘇和恢復(fù)至關(guān)重要，而選擇