為什么需要進(jìn)行活細(xì)胞標(biāo)記？

一、活細(xì)胞標(biāo)記：

細(xì)胞功能和發(fā)病機(jī)制的許多關(guān)鍵研究成果都依賴(lài)于標(biāo)記活細(xì)胞。為了研究個(gè)體細(xì)胞行為、生長(zhǎng)和分化以及細(xì)胞間的相互作用，能夠永久地“標(biāo)記”細(xì)胞群而不影響其形態(tài)或功能是至關(guān)重要的。對(duì)細(xì)胞現(xiàn)象的研究，例如粘附、結(jié)合物形成、細(xì)胞毒性、吞噬作用、生長(zhǎng)促進(jìn)、存活時(shí)間、細(xì)胞凋亡和雜交瘤融合等，都依賴(lài)于可靠、無(wú)毒、穩(wěn)定的細(xì)胞標(biāo)記。

用于標(biāo)記細(xì)胞的早期方法使用熒光標(biāo)記（例如熒光素、羅丹明、Dil-C18-(3)或Hoechst染料）或者放射性標(biāo)記（例如125I-碘苷、111In-銦喔星和51Cr-鉻酸鈉）。這些方法在它們各自的時(shí)代都發(fā)揮了很好的作用，但也都有各自的局限性和缺點(diǎn)。有些方法不夠穩(wěn)定，因此它們會(huì)泄漏并轉(zhuǎn)移到混合群體中的其他細(xì)胞，這會(huì)產(chǎn)生混淆的結(jié)果。有些方法則改變細(xì)胞功能或具有細(xì)胞毒性，因此導(dǎo)致與其使用直接相關(guān)的實(shí)驗(yàn)偽影。最后，這些方法所實(shí)現(xiàn)的標(biāo)記通常弱或不均勻，使得檢測(cè)困難并且不可能設(shè)計(jì)可靠的標(biāo)記方案。

01 推薦：PKH熒光細(xì)胞連接子染料

PKH染料以其發(fā)現(xiàn)者Paul Karl Horan的名字命名，是獲得專(zhuān)利的熒光染料和細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，已成功用于動(dòng)物、植物和細(xì)菌細(xì)胞，甚至可以染色含有非細(xì)胞膜的顆粒。標(biāo)記的細(xì)胞可通過(guò)培養(yǎng)以及在體內(nèi)進(jìn)行研究?？焖俜至训募?xì)胞（例如雜交瘤）以及非增殖細(xì)胞（例如紅細(xì)胞）亦可被標(biāo)記和跟蹤。

有三種不同的PKH染料可用于標(biāo)記細(xì)胞—PKH2、PKH26和PKH67。PKH2和PKH67是綠色熒光標(biāo)記，兩者均可用顯微鏡和配有熒光素過(guò)濾器的流式細(xì)胞儀檢測(cè)。由于它們的發(fā)射光譜與紅色區(qū)域幾乎沒(méi)有重疊，因此它們非常適用于細(xì)胞毒性研究，與紅色熒光活力探針如碘化丙啶（PI）和7-氨基放線(xiàn)菌素D（7-AAD）以及其他紅色標(biāo)記如R-藻紅素和德克薩斯紅結(jié)合使用。它們也非常適合植物研究，因?yàn)樗鼈儽苊饬思t色區(qū)域葉綠素自發(fā)熒光的干擾。

PKH2的體內(nèi)半衰期為5-8天，因此非常適合中短期研究。PKH67具有比PKH2更長(zhǎng)的脂肪族尾部，產(chǎn)生更穩(wěn)定的標(biāo)記和更少的細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。其體內(nèi)半衰期為10-12天。PKH2的先前使用者可能會(huì)發(fā)現(xiàn)，在中長(zhǎng)期研究中以及在必須最小化細(xì)胞間轉(zhuǎn)移的研究中，PKH67能產(chǎn)生更好的結(jié)果。

PKH26是一種紅色熒光染料。它具有最長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期—超過(guò)100天—這使其特別適用于體內(nèi)細(xì)胞跟蹤、細(xì)胞增殖研究和其他長(zhǎng)期測(cè)定。?羅丹明或藻紅蛋白（PE）過(guò)濾器適用于PKH26檢測(cè)?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)熒光素激發(fā)波長(zhǎng)，但熒光強(qiáng)度會(huì)稍微降低。

PKH26與綠色PKH染料互補(bǔ)。在混合細(xì)胞群的研究中，它可以在不受PKH2、PKH67或熒光標(biāo)記抗體干擾的情況下定量。

PHK熒光細(xì)胞染料的優(yōu)勢(shì)：

• 可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定、均勻、強(qiáng)烈和可再現(xiàn)的熒光標(biāo)記

• 穩(wěn)定標(biāo)記長(zhǎng)達(dá)100天

• 無(wú)細(xì)胞毒性，對(duì)生物活性或增殖活性無(wú)影響

• 染色強(qiáng)烈且易于使用

• 多功能?—?適用于任何細(xì)胞類(lèi)型

• 從細(xì)胞到細(xì)胞的泄漏或轉(zhuǎn)移最小

02 適合標(biāo)記的細(xì)胞類(lèi)型

1. 造血細(xì)胞：CD34+干細(xì)胞，正常祖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，培養(yǎng)起始細(xì)胞

2.?非造血祖細(xì)胞

3. 免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞、細(xì)胞毒性或自身免疫性效應(yīng)細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞

4. 其他血液或骨髓細(xì)胞：紅細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，血小板，基質(zhì)細(xì)胞，肺纖維細(xì)胞

5. 培養(yǎng)或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞或細(xì)胞系：腫瘤細(xì)胞和細(xì)胞系，成纖維細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞，雜交瘤，t細(xì)胞系

6. 其他原代細(xì)胞：雞生殖細(xì)胞、胚胎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、白血病母細(xì)胞、肥大細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞、成肌細(xì)胞、神經(jīng)元和神經(jīng)元前體、平滑肌細(xì)胞

7. 細(xì)菌，寄生蟲(chóng)：枯草芽孢桿菌、杜氏利士曼原蟲(chóng)、單核李斯特菌、雞瘧原蟲(chóng)、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、曼氏血吸蟲(chóng)、艾滋病病毒、旋毛蟲(chóng)、霍亂弧菌

8. 其他生物：病毒、原生質(zhì)體、浮游植物、紅細(xì)胞幽靈、氟碳乳劑、吞噬體

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