Mag Fura 2；細胞內(nèi)鎂離子探針
Mag-fura-2 四鉀鹽是一種細胞內(nèi)鎂離子特異性熒光探針，屬于紫外光激發(fā)的比率式探針。水溶性的鹽形式適用于通過顯微注射、從膜片移液管注入。
圖1.Mag Fura 2化學結(jié)構(gòu)
樣本實驗protocol
以下是我們推薦的將 AM 酯加載到活細胞中的方案。 本方案僅提供指導原則，應(yīng)根據(jù)您的具體需要進行修改。
在生長培養(yǎng)基中過夜制備細胞。
第二天，將 1X Mag-Fura-2 AM 工作溶液添加到您的細胞板中。
注意： 如果您的化合物干擾血清，請在染料加載前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基。
在 37 °C 的細胞培養(yǎng)箱中孵育載有染料的板 30 至 60 分鐘。
注意 孵育染料超過 1 小時可以提高某些細胞系的信號強度。
用 HHBS 或您選擇的緩沖液（包含陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑，如 1 mM probenecid，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。
根據(jù)需要添加興奮劑，同時使用配備 Fura 2 濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（如 FlexStation）的熒光板讀取器測量熒光，在 Ex/Em1 = 340/510 nm 截止 475 nm 和 Ex/Em2 = 380/510 nm 截止波長 475 nm。
案例
圖2.Mrs2 KD 對細胞內(nèi) Mg2+ 穩(wěn)態(tài)的影響：同時加載 Mag-Fura-2 (a) 和 MitoFluor Red (b) 的 HeLa 細胞圖像。 (c–f) 面板 a 和 b 中盒裝區(qū)域的放大視圖。 (c,d) Mag-Fura-2 在同一細胞中的定位，如圖 a 和 b 所示，在 (c) 和之后 (d) 毛地黃皂苷的細胞膜透化作用之前。 (e) 毛地黃皂甙細胞膜透化后 MitoFluor Red 的定位。 (f) 顯示了合并后的圖像。 (g) 對照和 Mrs2 KD HeLa 細胞中的線粒體 Mg2+ 水平。 比較在 340nm 和 380nm 激發(fā)的 Mag-Fura-2 熒光的比率，表明線粒體 Mg2+ 水平，顯示 Mrs2 KD 細胞減少（n =148 對照，n =105 Mrs2 KD 細胞來自 5 個實驗） . (h–j) 通常裝載 Mag-Fura-2 的 HeLa 細胞圖像。 (h) 用 emGFP 標記的 Mrs2 KD 細胞的熒光圖像。 (i) 載有 Mag-Fura-2（綠色）的對照和 emGFP 標記（紅色）Mrs2 KD 細胞的合并熒光圖像。 (j) 載有 Mag-Fura-2 的 HeLa 細胞在 340 和 380nm 激發(fā)下的熒光發(fā)射比圖像。 偽彩色顯示了在 340nm 到 380nm 激發(fā)的 Mag-Fura-2 信號的發(fā)射比。 (k) 對照和 Mrs2 KD 細胞中的胞質(zhì) Mg2+ 水平。 在 Mrs2 KD 細胞中，細胞溶質(zhì) Mg2+ 水平高于對照細胞（n = 304 對照，n = 384 Mrs2 KD 細胞來自 5 個實驗）。
