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CRISPR KO Total Solution | 如何快速定位適合您的guide RNA?

2023-06-26 09:08 作者:分子科普小feng子  | 我要投稿

增強(qiáng)基因敲除信心

Dharmacon?Edit-R CRISPR系列g(shù)uide RNA是經(jīng)驗(yàn)證的算法設(shè)計(jì)的,可實(shí)現(xiàn)高特異性的功能基因敲除,因此您可以對(duì)敲除結(jié)果充滿信心。

適應(yīng)多種工作流程的靈活性

A. DNA-free體系:合成sgRNA或crRNA: tracrRNA,搭配Cas9蛋白或mRNA

B. Lentiviral sgRNA:慢病毒質(zhì)粒載體形式,更適合無法化轉(zhuǎn)/電轉(zhuǎn)的難轉(zhuǎn)染細(xì)胞

C. Lentiviral All-in-one sgRNA: 單個(gè)試劑即可完成基因敲除

如何選擇合適的gRNA?

根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用及細(xì)胞類型,選擇合適的gRNA,可參考下表:

*僅用于S. pyogenes Cas9的定制載體設(shè)計(jì)
**需搭配熒光Cas9 mRNA共轉(zhuǎn)染

為什么更推薦DNA-free體系?

1.?DNA-free體系定義:?CRISPR-Cas9體系中不含任何DNA載體形式組分,可通過化學(xué)轉(zhuǎn)染、顯微注射或電轉(zhuǎn)進(jìn)行編輯

1)全RNA體系:sgRNA+Cas9 mRNA; crRNA: tracrRNA+Cas9 mRNA

2)RNP體系:sgRNA+Cas9 蛋白; crRNA: tracrRNA+Cas9 蛋白

2.?DNA-free體系優(yōu)勢(shì):

編輯效率更高:特殊設(shè)計(jì)算法、Dharmacon專利2’-ACE化學(xué)修飾[1]保證更高的編輯效率。

(2)脫靶效應(yīng)更低:Dharmacon CRISPR特異性分析工具不僅可以識(shí)別多個(gè)錯(cuò)配,還能夠識(shí)別RNA和DNA序列間隙進(jìn)行脫靶認(rèn)證,最終投放效果最好的sgRNA/crRNA到產(chǎn)品中,

有效降低脫靶效應(yīng)[2]。

(3)安全性更高:瞬時(shí)表達(dá)、無DNA整合風(fēng)險(xiǎn)、無啟動(dòng)子兼容問題。


(4)簡(jiǎn)便性更強(qiáng):即買即用,無需構(gòu)建質(zhì)粒載體和病毒級(jí)實(shí)驗(yàn)環(huán)境,一步轉(zhuǎn)染,顯著縮短實(shí)驗(yàn)周期。



(5)支持多靶點(diǎn)編輯:可通過轉(zhuǎn)染多條sgRNA/crRNA對(duì)細(xì)胞多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行編輯,無需構(gòu)建多靶點(diǎn)載體。

(6)支持CRISPR快速篩選:陣列形式sgRNA/crRNA文庫,是大規(guī)模文庫篩選的理想選擇。

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