泛素/蛋白酶體途徑（UPP）：泛素（Ub）對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個(gè)影響幾乎所有細(xì)胞功能的關(guān)鍵調(diào)控過(guò)程。除了Ub在蛋白質(zhì)降解中的既定作用外，Ub現(xiàn)在還參與了細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、DNA損傷反應(yīng)、蛋白質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞周期進(jìn)程、炎癥、免疫反應(yīng)和凋亡調(diào)節(jié)。泛素化是通過(guò)Ub的c端與目標(biāo)底物上的賴氨酸（Lys）殘基的s-氨基之間的異肽連接而發(fā)生的(1)。Ub本身有7個(gè)賴氨酸殘基（K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63），其中每個(gè)殘基都可以參與進(jìn)一步的泛素化，生成polyUb鏈(2)。Ub通過(guò)各種賴氨酸形成聚合物的能力似乎是該系統(tǒng)在調(diào)節(jié)細(xì)胞過(guò)程中的多功能性的核心。這些聚合物最廣泛的特征是通過(guò)K48或K63.K48-linked polyUb連接，主要靶向蛋白酶體降解，而K63連接的polyUb似乎調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能、亞細(xì)胞定位或蛋白質(zhì)-蛋白相互作用（3；4）。越來(lái)越多的證據(jù)表明K11連接的polyUb參與有絲分裂調(diào)控（5-7），對(duì)這種連鎖類型的研究范圍有望在未來(lái)幾年反映K48和K63。隨著疾病狀態(tài)和/或特定的細(xì)胞過(guò)程，對(duì)其他連鎖類型的興趣將呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。泛素化是一個(gè)可逆的、動(dòng)態(tài)的過(guò)程。泛素化機(jī)制，由E1、E2和E3等酶組成，在單體和聚合物狀態(tài)下協(xié)同作用于泛素化蛋白質(zhì)。單鏈和聚脲鏈的對(duì)應(yīng)去除（以及polyb鏈降解）是通過(guò)去泛素化酶（DUBs）完成的。

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艾美捷UbiQuant Kit用于準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)胞和組織中總泛素（poly- + mono-）的濃度。該試劑盒僅用于研究用途，不用于人類或動(dòng)物的診斷或治療應(yīng)用。

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UbiQuant?ELISA是一種sandwich測(cè)定法，可以絕對(duì)測(cè)量細(xì)胞裂解物中的泛素。這種基于平板的測(cè)定依賴于使用專有的泛素結(jié)合試劑捕獲總泛素。酶聯(lián)抗泛素單克?。╒U-2）抗體產(chǎn)生由酶標(biāo)儀評(píng)估的信號(hào)。使用泛素標(biāo)準(zhǔn)曲線可直接測(cè)量泛素濃度。

UbiQuant Kit部件：

除非另有說(shuō)明，否則所有部件應(yīng)儲(chǔ)存在4°-8°C的溫度下。

涂層板：提供一（1）個(gè)預(yù)涂層96孔條形板。這個(gè)將板干燥并真空包裝。如果未在一個(gè)內(nèi)使用（1） 一個(gè)月取下盤子，在-80°C下儲(chǔ)存。

條形支架：提供一（1）個(gè)空條形板框架。

初級(jí)抗體（PA1）：1小瓶在PBS中的200倍mAb VU-2濃縮物含有0.02%NaN3。

標(biāo)準(zhǔn)品（pUb）：2瓶?jī)龈煞核貥?biāo)準(zhǔn)品（鏈+游離）。

小瓶中含有5個(gè)mg總泛素。

致敏試劑1（SR1）：2 mL 20倍原液（N.b.含有戊二醛）

增敏試劑2（SR2）：4 mL 8x原液

封閉濃縮液（BC）：12 mL 5X封閉劑

檢測(cè)抗體（DA1）：1小瓶200X抗小鼠HRP綴合物

塑料板密封：提供四（4）個(gè)

檢測(cè)試劑1（DR1）：魯米諾試劑0.5 mL小瓶

檢測(cè)試劑2（DR2）：0.5 mL穩(wěn)定過(guò)氧化物試劑小瓶

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UbiQuant Kit文獻(xiàn)參考：

1. Pickart, C. M. (2001) Mechanisms underlying ubiquitination Annu Rev Biochem 70, 503-

33

2. Xu, P. and Peng, J. (2008) Characterization of polyubiquitin chain structure by middledown spectrometry Anal Biochem 80, 3438-3444

3. Ikeda, F. and Dikic, I. (2008) Atypical ubiquitin chains: new molecular signals. EMBO

Rep 9, 536-542

4. Pickart, C. M. and Fushman, D. (2004) Polyubiquitin chains: polymeric protein signals

Curr Opin Chem Biol 8, 610-616

5. Garnett, M. J., Mansfeld, J., Godwin, C., Matsusaka, T., Wul, J., Russell, P., Pines, J.,

and Venkitaraman, A. R. (2009) UBE2S elongates ubiquitin chains on APC/C substrates

to promote mitotic exit Nat Cell Biol 11, 1363-1369

6. Williamson, A., Wickliffe, K. E., Mellone, B. G., Song, L., Karpen, G. H., and Rape, M.

(2010) Identification of a physiological E2 module for the human anaphase-promoting

complex PNAS 106, 18213-18218

7. Wu, L., Nam, Y. J., Kung, G., Crow, M. T., and Kitsis, R. N. (2010) Induction of the

apoptosis inhibitor ARC by Ras in human cancers J Biol Chem 285, 19235-19245