腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細(xì)胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適于短時間內(nèi)進行基因高表達(dá)的實驗，與其它病毒相比，腺病毒優(yōu)勢在于插入片段較長，表達(dá)活性強。

　體外應(yīng)用時，腺病毒載體轉(zhuǎn)基因效率高（接近100%的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率），且可轉(zhuǎn)導(dǎo)不同類型的細(xì)胞，對于大量難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內(nèi)應(yīng)用時，由于腺病毒免疫原性強，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎癥反應(yīng)和機體免疫反應(yīng)，對動物體征和實驗結(jié)果的客觀性造成影響。

　腺病毒包裝骨架達(dá)質(zhì)粒與穿梭質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞，待細(xì)胞出現(xiàn)CPE狀態(tài)后通過收集細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解物，通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。?

　CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養(yǎng)細(xì)胞侵染后產(chǎn)生的細(xì)胞變性，利用此種病變效應(yīng)可進行病毒定量。
腺病毒滴度檢測

　檢測方法：酶聯(lián)免疫法腺病毒滴度測定，根據(jù)計算感染后染成褐色的陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度。
?實驗原理：腺病毒感染的陽性細(xì)胞表達(dá)的衣殼蛋白被染成褐色。
?檢測方法：免疫顯色方法
?實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細(xì)胞結(jié)合，再用HRP標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合，經(jīng)顯色液顯色，被感染的細(xì)胞變成褐色，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度。腺病毒載體優(yōu)勢

①?表達(dá)快，腺病毒感染細(xì)胞后，1-2天即可表達(dá)
②?載體容量大，感染效率高，常用于感染難感染的細(xì)胞
③?不整合到染色體中，無插入致突變性
④ ?具有嗜肝性，易于感染肝細(xì)胞，腺病毒的體內(nèi)應(yīng)用是用于感染肝臟

　不過由于腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥，體內(nèi)應(yīng)用需謹(jǐn)慎。

逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus），又稱反轉(zhuǎn)錄病毒，是一種RNA病毒，其兩端為長末端重復(fù)序列（LTR）。該病毒呈球形，有包膜，表面有刺突，顆粒直徑為100nm左右。逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組有三個基因：Gag-編碼病毒的核心蛋白；Pol-編碼逆轉(zhuǎn)錄酶；Env-編碼病毒的被膜糖蛋白。
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逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝及侵染細(xì)胞過程
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝采用三質(zhì)粒或四質(zhì)粒系統(tǒng)進行包裝，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，通過超速離心濃縮純化和收集病毒。

滴度檢測方法：定量PCR檢測干擾后細(xì)胞基因組中外源DNA拷貝數(shù)。
滴度檢測原理：逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)外源基因以逆轉(zhuǎn)錄方式整合進目的細(xì)胞基因組。

逆轉(zhuǎn)錄病毒基因表達(dá)時，需在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下首先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，隨后進入細(xì)胞核隨機整合到宿主細(xì)胞DNA上，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯，完成基因的表達(dá)。

逆轉(zhuǎn)錄病毒特點
逆轉(zhuǎn)錄病毒的最大特點在于其特異性感染分裂期細(xì)胞，這是因為只有當(dāng)被感染細(xì)胞處于細(xì)胞分裂期間，逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA基因組才能接觸到宿主細(xì)胞的遺傳物質(zhì)

基于上述特性，逆轉(zhuǎn)錄病毒適用于干細(xì)胞相關(guān)的大量研究，如神經(jīng)干細(xì)胞研究、造血干細(xì)胞研究。體內(nèi)應(yīng)用時，逆轉(zhuǎn)錄病毒適用于研究成年新生神經(jīng)元或膠質(zhì)前體細(xì)胞的工作。