一.我前一段時間做三聚氰胺用C18色譜響應(yīng)值很小，幾乎無法檢測，可是檢測標(biāo)準(zhǔn)就是用的C18，后來我用RP18結(jié)果響應(yīng)值很好，不知道什么原因，請問這兩個柱子不都是反相色譜柱么？他倆之間有什么不同？

? ? ? ?答：RP18就是C18吧，不過C18柱之間也有區(qū)別，測定三聚氰胺一般要用極性比較大的水性C18柱。

二.磺化交聯(lián)的苯乙烯-二乙烯基共聚物為填充劑的色譜柱在儲存過程未注意放在冰箱中，導(dǎo)致發(fā)霉后，柱效急劇下降，能何種方法將此色譜柱修復(fù)好？

? ? ? ?答：聚合物柱子因為不怕酸堿，就直接用強酸強堿清洗。如果是H型，用1M硫酸沖洗；如果是Ca型，可以先用1M硫酸沖洗，再用EDTA鈣鹽轉(zhuǎn)換回Ca型柱；如果是中性的聚合物反相柱，直接用1M的NaOH沖洗。

三.我有一個標(biāo)準(zhǔn)的穩(wěn)定性檢測分析方法它是建立在某一供應(yīng)商的碳18柱上我知道有另一個廠家生產(chǎn)同樣的碳18柱但價錢是它的一半如果我更換柱子會不會影響到分析方法。

? ? ? ?答：要看這一分析方法的具體要求。如果方法中有說明“使用某一色譜柱或與其同樣的柱子，”那么，就可以使用別的柱子來替換。但要注意，不能光看一個柱子標(biāo)為碳18柱，或是其宣傳等價于某某柱，就認為該柱適用于所有方法。必須要驗證色譜柱的等價性。

? ? ? ?我們需要考查使用新柱子時，系統(tǒng)適應(yīng)性是否可以通過驗證。如果可以獲得系統(tǒng)適用性測試中所要求的保留值，分離度以及其它參數(shù)等，就可以使用該柱。推薦使用系統(tǒng)適用性測試樣品以及其它的典型樣品來進行考查，以保證雜質(zhì)和降解物在正確的保留時間出峰并給出正確的濃度響應(yīng)；并且在新柱子上獲得的分析結(jié)果要等價于在原柱子上的結(jié)果。

四.請問我做一種藥的分析查美國藥典規(guī)定使用100mm × 40mm × 8μm的色譜柱流速3mL/min可現(xiàn)在市場上已不容易找到這種規(guī)格的產(chǎn)品于是我按USP中色譜柱比較的數(shù)據(jù)庫的指引選了一款選擇性一致的等價色譜柱其規(guī)格是100mm × 46mm × 3μm的色譜柱當(dāng)選用3mL/min的流速時發(fā)現(xiàn)柱壓超高請問我如何對方法進行調(diào)整以滿足USP的要求？

? ? ? ?答：流速調(diào)整原則是流動相通過柱子的線速度一致，等價柱的截面積大了，流速也應(yīng)增加才能保持相同的線速度。新流速計算結(jié)果是：（4.6/4.0）2x3.0=4.0ml/min。但3ml/min流速都已導(dǎo)致柱壓太高，4.0ml/min明顯不行。好在USP還有個允許±50%的流速調(diào)整指導(dǎo)原則，這樣將流速調(diào)至2.0ml/min既符合USP規(guī)定，又能使柱壓降到可接受的范圍，但這種改變不能引起其它不好后果。

? ? ? ?這個例子中，等度分析中，流速改變會引起塔板數(shù)和峰寬的改變，但不會影響峰的選擇性。3um粒徑色譜柱柱效比8um的高很多，可考慮縮短柱長以補償或部分補償流速降低造成的測定時間增加。所以，更佳選擇是50 mm ×4.6 mm, 3μm的柱子，2.0ml/min的流速運行，可以在符合USP規(guī)定的情況下，又得到更快速的測定分離。

五.最近我非常的沮喪，按照藥典上的色譜條件和方法做某藥物的分析，卻始終得不到滿意的結(jié)果。有人建議我對色譜條件，如進樣量、流動相pH和溫度等，進行微調(diào)以得到良好的峰形和分離效果，可按公司規(guī)定我不能這樣做，怎么辦？

? ? ? ?答：如果你心里老有這個思維定勢“按規(guī)定，我不能......”，然后什么也不敢做，那真是不好辦！只有去做了，去試著改變條件看看得到什么結(jié)果，你才能發(fā)現(xiàn)問題所在。如果改變條件后，仍得不到好結(jié)果，就要去找色譜條件以外的原因，如色譜柱、色譜儀器以及樣品和制樣過程中的是否存在問題？不管通過微調(diào)你是否取得了好結(jié)果，你也有了向領(lǐng)導(dǎo)匯報問題和解決方案的依據(jù)。

? ? ? ?而且，絕對不能調(diào)整藥典規(guī)定色譜條件的說法通常是不對的。美國藥典USP說的是如果改變藥典方法需要重新做方法驗證，但方法調(diào)整或者稱微調(diào)以符合系統(tǒng)適應(yīng)性的要求是允許的，是不需要重新做方法驗證的。USP列了調(diào)整的幾條指導(dǎo)原則，如±50%的流速調(diào)整，±10°C的溫度調(diào)節(jié)等等（詳見"Chapter 621,Chromatography," United States Pharmacopeia No. 31-NF 26, (2008).）。當(dāng)然既然是指導(dǎo)原則，這些規(guī)定都不是絕對的，如溫度調(diào)整±10 °C，對有些方法適用，對另外的方法則±5 °C的調(diào)整都會有問題，我們應(yīng)該依據(jù)具體情況作出明智的科學(xué)判斷。

總結(jié)

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