從專業(yè)角度認(rèn)識 重組人干細(xì)胞因子rHuSCF,一種造血生長因子
重組人干細(xì)胞因子是一種造血生長因子,通過c-Kit受體發(fā)出信號來發(fā)揮其活性。SCF和c-Kit對于黑素細(xì)胞和生殖細(xì)胞譜系的造血細(xì)胞的生存、增殖和分化至關(guān)重要。人SCF在小鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出低活性,而小鼠和大鼠SCF在人細(xì)胞上完全活性。人SCF基因編碼273個氨基酸的跨膜蛋白,其中包含25個氨基酸的N端信號序列、189個氨基酸的胞外結(jié)構(gòu)域、23個氨基酸的膜外結(jié)構(gòu)域和36個氨基酸的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。分泌可溶性SCF是通過膜錨定前體的蛋白水解加工產(chǎn)生的。重組人SCF是含有165個氨基酸殘基的18.4kDa多肽,其對應(yīng)于分泌可溶性SCF形式的序列。
AA Sequence:
MEGICRNRVT NNVKDVTKLV ANLPKDYMIT ?LKYVPGMDVL PSHCWISEMV VQLSDSLTDL LDKFSNISEG LSNYSIIDKL VNIVDDLVEC ?VKENSSKDLK KSFKSPEPRL FTPEEFFRIF NRSIDAFKDF VVASETSDCV VSSTLSPEKD ?SRVSVTKPFM LPPVA
在大腸桿菌中產(chǎn)生的干細(xì)胞因子人類重組蛋白是一條含有165個氨基酸的非糖基化單鏈,分子量為18409道爾頓。
氨基酸序列
測定了前五個N端氨基酸的序列,發(fā)現(xiàn)其為Met-Glu-Gly-Ile-Cys。
生物活性
通過對人TF-1細(xì)胞的劑量依賴性刺激測定的ED50小于2 ng/ml,對應(yīng)于500000 IU/mg的比活性。
蛋白質(zhì)含量
通過兩種獨立的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量
1.在280nm的紫外光譜,使用0.52的吸收值作為0.1%(1mg/ml)溶液的消光系數(shù)。該值由蛋白質(zhì)序列的PC基因計算機(jī)分析程序(IntelliGenetics)計算。
2.使用干細(xì)胞因子的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參考標(biāo)準(zhǔn),通過RP-HPLC進(jìn)行分析。
