熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)是與熒光染料共價(jià)結(jié)合的蛋白質(zhì)分子。熒光標(biāo)記通常作為研究構(gòu)象動(dòng)力學(xué)和分子相互作用的工具，或跟蹤蛋白質(zhì)的運(yùn)動(dòng)，以了解其生物學(xué)功能。熒光分析可以實(shí)時(shí)在溶液中進(jìn)行，具有高的時(shí)間分辨率，靈敏度可達(dá)到單分子級(jí)別。下面和瑞禧生物小編一起來(lái)看Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒（10~100mg標(biāo)記量）的概述與實(shí)驗(yàn)步驟。

熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒

Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7偶聯(lián)試劑盒可以通過(guò)抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴氨酸），簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與Cy5/Cy5.5/Cy7的共價(jià)偶聯(lián)。

此為通用型試劑盒，適合各種分子量不一致的抗體/蛋白偶聯(lián)Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7，且不會(huì)損失抗體/蛋白。

試劑盒組成與存儲(chǔ)

收到后將Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix(含10%Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7染料)儲(chǔ)存在-20?C，Coupling Reagent、溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長(zhǎng)期保存。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10mg)，溶解于1mL純水中，加入100μLCoupling Reagent，混合均勻待用。

注：抗體/蛋白在1~10mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100μLCoupling Reagent。超出此范圍，請(qǐng)按比例增減，如0.5mg抗體/蛋白，建議使用0.5mL純水溶解并加入50μLCoupling Reagent。

(以下步驟按標(biāo)記1mg抗體/蛋白為例)

2.根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱取0.1~1mgCy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix固體加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a)若Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix用量超出1mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過(guò)量，引起熒光部分淬滅;

(b)若低于1mg的Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix難以稱取，可先取1mg Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix固體溶解于100μLCy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶解液，再按需取Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。

3.室溫避光反應(yīng)30min，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間不影響偶聯(lián)效率。

4.將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000rpm超濾5min，即可除去未反應(yīng)的Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7-mix，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復(fù)超濾1~2次。

5.使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy3/Cy5/Cy5.5/Cy7熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液。

注意事項(xiàng)

1.偶聯(lián)前抗體/蛋白中可能含有成分，建議低于以下比例:

注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過(guò)超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記。

2.偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4℃下可保存6~12個(gè)月。如需保存更長(zhǎng)時(shí)間，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存。

RXYWX.2022.7.29