滅活疫苗病毒結(jié)構(gòu)蛋白序列表征
滅活疫苗是一種常見(jiàn)的疫苗類(lèi)型,它們是通過(guò)采集病原微生物(如病毒或細(xì)菌),然后通過(guò)物理或化學(xué)方法使其喪失病原性,即不能再引發(fā)疾病,但仍能激發(fā)免疫反應(yīng)的疫苗。這些疫苗保留了病原體的表面抗原,但已經(jīng)失去了病原體的活性,這些抗原可以刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對(duì)性的免疫反應(yīng),從而幫助預(yù)防疾病。對(duì)于病毒滅活疫苗來(lái)說(shuō),病毒的結(jié)構(gòu)蛋白是其重要的組成成分。病毒的結(jié)構(gòu)蛋白主要包括病毒的表面蛋白和核殼蛋白。這些蛋白質(zhì)是病毒生命周期和病毒感染宿主的關(guān)鍵因素,也是疫苗引發(fā)免疫反應(yīng)的主要靶點(diǎn)。這些結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的序列,即其氨基酸序列,是確定抗原蛋白功能的基礎(chǔ),對(duì)滅活疫苗類(lèi)藥物進(jìn)行病原體結(jié)構(gòu)蛋白的氨基酸序列鑒定,不僅可以確保疫苗的質(zhì)量和有效性,還有助于理解和預(yù)測(cè)免疫反應(yīng),監(jiān)控病毒變異,以及疫苗的改進(jìn)和開(kāi)發(fā)。
常用的蛋白質(zhì)序列分析方法主要包括質(zhì)譜法和非質(zhì)譜法(Edman降解法)兩類(lèi)。
Edman測(cè)序又稱(chēng)Edman降解法測(cè)序,是由埃德曼在上世紀(jì)50年代創(chuàng)立的用于測(cè)定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的方法。Edman測(cè)序基本原理是將蛋白多肽的N端氨基酸用化學(xué)方法依次斷裂,每次只斷裂一個(gè)氨基酸,通過(guò)高效液相色譜(HPLC)分析斷裂后氨基酸片段,再將少了一個(gè)氨基酸的多肽鏈回收,重復(fù)進(jìn)行以上操作,直到最后鑒定出整條多肽鏈的氨基酸排列順序。
質(zhì)譜法是目前使用最為廣泛的一種蛋白質(zhì)序列分析方法,基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)序列分析結(jié)合對(duì)應(yīng)算法和生物信息學(xué)技術(shù),可以實(shí)現(xiàn)蛋白的N/C末端序列分析、全序列分析和從頭測(cè)序分析,其可用于已知蛋白的表達(dá)驗(yàn)證和未知蛋白的氨基酸序列分析。基于質(zhì)譜的蛋白序列分析通過(guò)特異性蛋白酶將目標(biāo)蛋白酶切為肽段,再經(jīng)過(guò)MS/MS或LC-MS/MS檢測(cè)得到肽段二級(jí)質(zhì)譜圖,解析譜圖獲得肽段的氨基酸序列,最后根據(jù)肽段間的重合互補(bǔ)性完成各肽段的拼接,由此可實(shí)現(xiàn)完整蛋白質(zhì)的序列分析。

生物制品表征蛋白序列分析示意圖
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