一、概念

胎牛血清是一種廣泛應用于細胞培養(yǎng)中的添加劑，它時維持細胞生長和代謝穩(wěn)態(tài)方面的關(guān)鍵者。在細胞培養(yǎng)過程中，細胞需要在富含營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子、激素和其他成分的培養(yǎng)基下來生長和繁殖。

二、來源

?胎牛血清是通過母牛刨腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采血獲得的新鮮胎牛全血，經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白成分的淡黃色透明上清液體，后經(jīng)生產(chǎn)使用多級高置流膜過濾技術(shù)和三級0.1μm終端微濾方法處理后。常用于細胞培養(yǎng)相關(guān)實驗。

三、功能/作用

1）提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

2）提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3）有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4）是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

5）起酸堿度緩沖液作用。

6）提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害

四、如何避免胎牛血清使用時出現(xiàn)黑點？

1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

2）培養(yǎng)基無需37℃水浴。

3）培養(yǎng)基保持pH值7.0-7.2。

4）嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

5）掌握細胞傳代的時機，細胞切勿生長過老。

五、如何避免胎牛血清中產(chǎn)生沉淀？

1）解凍血清時，清隨時將之搖晃均勻。使溫度及成分均一，減少沉淀產(chǎn)生。

2）血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心造成氣泡）使溫度與成分均一。

3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到破壞，從而影響血清品質(zhì)。

5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

6）若必須做血清的熱滅活，清遵守56℃，30min的原則，并且隨時搖晃均勻，溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物增多。

六、血清中包含絮狀沉淀物是什么？怎么處理？

?沉淀包含的是纖維蛋白和脂蛋白，這屬于正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)，要除去沉淀，需要離心血清（例：400g，1-2min）或者更簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶中（但我們一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為陳定會堵塞濾膜而無法過濾）在大多數(shù)情況下我們輕輕搖動陳地啊并加熱至37℃就會在溶解。綜上所訴使用產(chǎn)品時搖動并加熱血清至37℃，沉淀就會消失。

七、有必要做熱滅活嗎？

?在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理，不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量，因為經(jīng)過熱處理的血清沉淀物的行程會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)有很多的"小黑點“常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中又會使此沉淀物更加增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

八、為何要進行熱滅活？

事實上，大部分血清都無需進行熱滅活，僅在培養(yǎng)部分特殊細胞時進行滅活，如在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞等特殊細胞時，推薦使用熱滅活血清，因為加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

九、血清需要做支原體檢測嗎？

?支原體污染是世界性問題，有報道指出，支原體輕微污染即可影響200多個基因的表達，Nature雜志從2013年起，要求涉及細胞培養(yǎng)的研究，必須進行支原體檢測。