「青蓮聚焦」蛋白質(zhì)組學(xué)FAQ蛋白產(chǎn)品相關(guān)問(wèn)題(三)
蛋白質(zhì)組學(xué)(英語(yǔ):proteomics,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。這個(gè)概念最早是在1994年,由Marc Wikins首先提出的新名詞。
上周二分享了蛋白產(chǎn)品相關(guān)問(wèn)題(二),本周二將分享蛋白產(chǎn)品相關(guān)問(wèn)題(三)~
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11.?mix?樣本的設(shè)置目的及設(shè)置方法
答案:設(shè)置內(nèi)參通道是為了保證校正不同?run?之間信號(hào)和儀器狀態(tài)差異,減小系統(tǒng)誤差,從而使得不同run的樣本能夠一起進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。mix?樣本是用所有需要一起進(jìn)行數(shù)據(jù)分析的樣本混合物。
12.?iTRAQ/TMT為何不能用于差異較大的物種或樣本?
答案:這主要是由于iTRAQ/TMT的技術(shù)特點(diǎn)所決定的。標(biāo)記定量的數(shù)據(jù)分析都是基于共有蛋白進(jìn)行的,特有蛋白會(huì)被過(guò)濾掉,無(wú)法進(jìn)行后面數(shù)據(jù)分析,因此不能用于差異較大的物種或樣本
13.?同一批上機(jī)的?iTRAQ/TMT?樣本,為何不能選取其中部分樣本單獨(dú)來(lái)分析?
答案:iTRAQ/TMT?是混樣上機(jī)的,數(shù)據(jù)質(zhì)控是以?run(即開(kāi)始分的餾分)為單位分析。獲得的總蛋白是所有上機(jī)樣本的共有蛋白。所以沒(méi)有辦法再單獨(dú)分析。
14.?標(biāo)記類(lèi)產(chǎn)品為何差異倍數(shù)會(huì)偏小?
答案:因?yàn)闃?biāo)記類(lèi)產(chǎn)品(iTRAQ、TMT)本身試劑特點(diǎn),樣本實(shí)際的差異倍數(shù)會(huì)有壓縮現(xiàn)象。因此差異倍數(shù)一般在?1.2,就可以說(shuō)明有差異足夠明顯,而對(duì)于非標(biāo)記類(lèi)的產(chǎn)品如?label free?、DIA,一般差異倍數(shù)要達(dá)到?1.5?才能說(shuō)明問(wèn)題。
15.?通過(guò)?iTRAQ/TMT?實(shí)驗(yàn),是否可以尋找不同樣本之間的有無(wú)差異蛋白或特有蛋白
答案:不可以,有如下幾個(gè)原因:
iTRAQ?實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用的是Proteome?Discoverer?軟件搜庫(kù),該軟件的算法分析對(duì)于極大和極小值均會(huì)賦值;
A.對(duì)于蛋白的定量,軟件采用的是肽段水平合并檢測(cè),很難排除其他相似離子干擾;
B.少量無(wú)定量值的蛋白可能是沒(méi)有檢測(cè)到唯一肽段,或者是報(bào)告離子峰太低,并不能說(shuō)明沒(méi)有該蛋白。
本周的FAQ就到此結(jié)束啦~
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