? ? ? ?大家好，今天跟大家分享一篇在Anal Chem上發(fā)表的文章，論文的題目為“Combining Mass Spectrometry with Paternò-Büchi Reaction toDetermine Double-bond Positions in Lipids at the Single-cell Level”。論文的通訊作者為俄克拉荷馬大學(xué)的Yang Zhibo助理教授。Yang教授的主要研究方向為單細胞質(zhì)譜分析及質(zhì)譜成像。

? ?? ?眾所周知，細胞是生命體的最小結(jié)構(gòu)單元?，F(xiàn)有的研究大多是針對于群體細胞進行研究。而由于細胞群體中每個細胞遺傳及表型的異質(zhì)性，單細胞水平的相關(guān)研究越來越成為研究的熱點。作為細胞的重要組成物質(zhì)之一，脂質(zhì)在細胞代謝和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用。含有一個或多個C=C雙鍵的不飽和脂肪酸是脂質(zhì)的一個亞類。鑒定不飽和脂肪酸中雙鍵的位置對于脂質(zhì)化學(xué)來說是非常重要的。已經(jīng)有大量的研究用于不飽和脂肪酸雙鍵位置確證的研究，例如Paternò–Büchi (PB)反應(yīng)。然而，由于單個細胞中分析物的量非常小(少量pLs)和缺乏適當(dāng)?shù)募夹g(shù)，在單細胞水平上的相應(yīng)研究仍未被探索。

? ? ? 本文設(shè)計了一種玻璃微管針，具有單細胞的取樣、裂解、PB微反應(yīng)及離子源噴針多種功能，并結(jié)合質(zhì)譜實現(xiàn)了對單個細胞中不飽和脂質(zhì)中個C=C雙鍵位置測定，實驗裝置如圖1所示。

? ? ? 首先，有機溶劑濃度對細胞裂解有很大影響，因此需要對抽樣溶劑進行了考量，選擇丙酮和二苯酮作為細胞裂解和PB反應(yīng)的溶液。丙酮和二苯酮作為PB反應(yīng)試劑時的機制如圖2所示。此外，作者還對玻璃微管針進行了表征并編寫了Python對于得到的數(shù)據(jù)進行分析。

? ? ? ?其次，作者將優(yōu)化好的方法用于單個細胞中不飽和脂質(zhì)的雙鍵位置的鑒定，對得到的完整數(shù)據(jù)進行分析后初步鑒定到16個不飽和脂質(zhì)，結(jié)果如表1所示。由于二苯酮會影響脂質(zhì)檢測的靈敏度，因此作者丙酮是更有效的PB反應(yīng)試劑。