1.引言

生物藥物研究領(lǐng)域中，蛋白質(zhì)定量是一項(xiàng)重要的任務(wù)。準(zhǔn)確地測(cè)量蛋白質(zhì)的表達(dá)水平對(duì)于了解疾病機(jī)制、藥物研發(fā)以及生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)具有關(guān)鍵意義。在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，質(zhì)譜技術(shù)是一種常用的方法。本文將重點(diǎn)介紹質(zhì)譜MRM（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）與iTRAQ/TMT定量?jī)煞N常見的蛋白質(zhì)組學(xué)定量方法，并對(duì)其進(jìn)行對(duì)比分析。

2.質(zhì)譜MRM定量

質(zhì)譜MRM是一種基于質(zhì)譜技術(shù)的定量方法，它通過(guò)選擇特定的肽段和轉(zhuǎn)換反應(yīng)離子對(duì)（transition）來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的定量。首先，通過(guò)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行分析，獲得肽段的質(zhì)譜譜圖。然后，選擇特定的肽段和其對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)換反應(yīng)離子對(duì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。通過(guò)測(cè)量這些離子對(duì)的峰面積，可以推斷出目標(biāo)蛋白質(zhì)的含量。

質(zhì)譜MRM定量方法具有高靈敏度、高選擇性和高通量的特點(diǎn)。它可以同時(shí)監(jiān)測(cè)多個(gè)肽段，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)蛋白質(zhì)的定量。此外，質(zhì)譜MRM定量方法還可以通過(guò)穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)（如15N標(biāo)記）來(lái)實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.iTRAQ/TMT定量

iTRAQ（同位素標(biāo)記化反應(yīng)標(biāo)記）和TMT（同位素標(biāo)記化標(biāo)記）是兩種常用的蛋白質(zhì)組學(xué)定量方法。它們通過(guò)在樣品中引入特定的同位素標(biāo)記化試劑，將不同樣品的蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記，然后將標(biāo)記的樣品混合在一起進(jìn)行質(zhì)譜分析。

iTRAQ和TMT定量方法具有高通量、高復(fù)現(xiàn)性和高靈敏度的特點(diǎn)。它們可以同時(shí)定量多個(gè)樣品，從而實(shí)現(xiàn)高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究。此外，iTRAQ和TMT定量方法還可以通過(guò)選擇性地標(biāo)記特定的氨基酸殘基（如精氨酸和賴氨酸）來(lái)實(shí)現(xiàn)定量的精確性。

4..質(zhì)譜MRM與iTRAQ/TMT定量的對(duì)比

質(zhì)譜MRM和iTRAQ/TMT定量方法在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中都具有重要的應(yīng)用價(jià)值，但它們也存在一些差異。

首先，質(zhì)譜MRM定量方法具有更高的靈敏度和選擇性。它可以選擇性地監(jiān)測(cè)目標(biāo)肽段，從而避免了復(fù)雜樣品中其他干擾物質(zhì)的影響。相比之下，iTRAQ/TMT定量方法需要對(duì)整個(gè)樣品進(jìn)行質(zhì)譜分析，可能會(huì)受到復(fù)雜樣品基質(zhì)的干擾。

其次，質(zhì)譜MRM定量方法適用于定量少量目標(biāo)蛋白質(zhì)的情況。它可以選擇性地監(jiān)測(cè)目標(biāo)肽段，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)少量目標(biāo)蛋白質(zhì)的定量。相比之下，iTRAQ/TMT定量方法適用于同時(shí)定量多個(gè)樣品的情況，但對(duì)于少量目標(biāo)蛋白質(zhì)的定量可能不夠準(zhǔn)確。

最后，質(zhì)譜MRM定量方法可以實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。通過(guò)穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)，可以將質(zhì)譜MRM定量結(jié)果與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，從而實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量。相比之下，iTRAQ/TMT定量方法只能實(shí)現(xiàn)相對(duì)定量，無(wú)法得到絕對(duì)定量結(jié)果。

5.結(jié)論

質(zhì)譜MRM和iTRAQ/TMT定量方法是生物藥物研究領(lǐng)域中常用的蛋白質(zhì)組學(xué)定量方法。質(zhì)譜MRM定量方法具有高靈敏度、高選擇性和高通量的特點(diǎn)，適用于定量少量目標(biāo)蛋白質(zhì)的情況。iTRAQ/TMT定量方法具有高通量、高復(fù)現(xiàn)性和高靈敏度的特點(diǎn)，適用于同時(shí)定量多個(gè)樣品的情況。在選擇定量方法時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體需求和樣品特點(diǎn)進(jìn)行選擇。