EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒樣品制備&操作步驟
T4是診斷甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn)的有用標(biāo)志物。甲狀腺素T4在甲狀腺功能減退患者中水平降低,在甲狀腺功能亢進(jìn)患者中水平升高。血液中的主要甲狀腺激素形式是甲狀腺素(T4),其半衰期比T3長(zhǎng)。T4在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)去碘酶(5'-碘酶)轉(zhuǎn)化為活性T3(比T4更具效力的三到四倍)。這些進(jìn)一步經(jīng)過(guò)脫羧和脫碘反應(yīng),產(chǎn)生碘代胺(T1a)和甲狀腺胺(T0a)。去碘酶的三個(gè)同功酶都是含硒酶,因此膳食中的硒對(duì)T3的產(chǎn)生至關(guān)重要。Edward Calvin Kendall于1915年首次分離出甲狀腺素。EZElisa? Thyroxine (T4) ELISA Kit采用競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶免疫測(cè)定技術(shù)。試劑盒中提供的微孔板已經(jīng)預(yù)涂有特異性抗T4的抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與生物素結(jié)合的T4加入相應(yīng)的微孔板孔中,T4(標(biāo)準(zhǔn)品或樣品)與預(yù)涂的特異性抗體結(jié)合的生物素結(jié)合的T4之間會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)。樣品中T4的含量越多,與生物素結(jié)合的T4結(jié)合的抗體越少。洗滌后,加入Avidin-HRP到孔中。加入底物溶液后,顏色的發(fā)展與樣品中T4的含量相反。停止顏色的發(fā)展并測(cè)量顏色的強(qiáng)度。 ? 艾美捷EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒基本參數(shù): 目錄號(hào):D-AEK0007 規(guī)格:48T/96T 儲(chǔ)存:未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)在4°C下保存12個(gè)月。 檢測(cè)范圍:20 ng/mL-320 ng/mL 靈敏度:10 ng/mL 特異性:EZElisa? Thyroxine (T4) ELISA Kit對(duì)T4的檢測(cè)具有高靈敏度和優(yōu)異的特異性。未觀察到T4與類似物之間的顯著交叉反應(yīng)或干擾。 適用樣品:血清、血漿 ? 供應(yīng)材料和儲(chǔ)存條件:
Note: Std1: 20 ng/mL; Std2: 40 ng/mL; Std3: 80 ng/mL; Std4: 160 ng/mL; Std5: 320 ng/mL.
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EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒試劑制備: 注意:在使用前,將所有試劑平衡至室溫。如果緩沖液濃縮物中出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)輕輕加熱它們直到完全溶解。1×洗滌緩沖液:將洗滌緩沖液(20×)用去離子水稀釋1:20,得到1×洗滌緩沖液。儲(chǔ)存在4°C。 ? 樣品制備: 1.?血清:使用血清分離管,在室溫下使樣本凝結(jié)30分鐘,然后以1,000 g的速度離心15分鐘。立即取出血清進(jìn)行檢測(cè),或?qū)颖痉盅b并儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。 2.?血漿:使用EDTA、肝素或檸檬酸作為抗凝劑采集血漿。在采集后30分鐘內(nèi)以1,000 g的速度離心15分鐘。立即進(jìn)行檢測(cè),或?qū)颖痉盅b并儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。 注意:不要使用明顯溶血或脂質(zhì)混濁的樣本。如果樣本將在24小時(shí)內(nèi)使用,可以儲(chǔ)存在2至8°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。在進(jìn)行檢測(cè)之前,應(yīng)將冷凍樣本緩慢恢復(fù)至室溫,并輕輕混合。 ? EZElisa甲狀腺素(T4) ELISA試劑盒操作步驟: 1.?從板框中取出多余的微孔條,放回含有干燥劑包裝的鋁箔袋中,并重新密封。 2.?每個(gè)孔加入50 μL的T4標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。建議將所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣本都復(fù)制加入微孔板中。設(shè)置一個(gè)空白孔,不加入任何溶液。 3.?向每個(gè)孔中加入50 μL的生物素結(jié)合的T4(不加入空白孔)。充分混合后,用提供的孔板蓋覆蓋,然后在37°C下孵育1小時(shí)。 4.?倒出每個(gè)孔中的液體并進(jìn)行洗滌,總共洗滌三次。使用多通道移液器或自動(dòng)微孔板洗滌器,將每個(gè)孔填滿1×洗滌緩沖液(250 μL),靜置10秒鐘,每個(gè)步驟完全去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。在最后一次洗滌后,倒轉(zhuǎn)孔板并用干凈的紙巾輕輕擦干任何剩余的1×洗滌緩沖液。 5.?向每個(gè)孔中加入50 μL的親和素-HRP(不加入空白孔),充分混合后,用提供的孔板蓋覆蓋。在37°C下孵育30分鐘。 6.?重復(fù)第4步中的洗滌步驟。 7.?向每個(gè)孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B,充分混合后,用提供的孔板蓋覆蓋。在37°C下孵育15分鐘。將孔板放在無(wú)風(fēng)處并避免光照。 8.?向每個(gè)孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液應(yīng)按照HRP底物的順序加入孔板中。孔中的顏色應(yīng)從藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果孔中的顏色是綠色,或者顏色變化不均勻,請(qǐng)輕輕敲擊孔板以確保充分混合。 9.?在30分鐘內(nèi)使用設(shè)置為450 nm的微孔板讀取器測(cè)定每個(gè)孔的吸光度。 ? 該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。