「青蓮聚焦」蛋白質(zhì)組學(xué)FAQ蛋白產(chǎn)品相關(guān)問題(二)
蛋白質(zhì)組學(xué)(英語:proteomics,又譯作蛋白質(zhì)體學(xué)),是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。這個概念最早是在1994年,由Marc Wikins首先提出的新名詞。
上周二分享了蛋白產(chǎn)品相關(guān)問題(一),本周二將分享蛋白產(chǎn)品相關(guān)問題(二)~
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6.?iTRAQ/TMT蛋白組學(xué)分析的優(yōu)點是什么?
答案:通過不同分子量的實際對不同來源樣品進行標記的方式,實現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組比較的目標,兩種方法都一次性完成(iTRAQ 8個/TMT 16個)全部樣品的定性定量分析,降低了實驗誤差,排除儀器造成的樣本間差異,穩(wěn)定性更高,操作簡單,數(shù)據(jù)分析流程簡單,適用于所有物種蛋白的定量分析。
7.?TMT?對儀器有哪些要求,目前有哪些儀器可以做該實驗?
答案:TMT試劑標簽之間的質(zhì)量差額在0.006Da左右,需要質(zhì)譜二級分辨率在50K以上才能準確分辨出不同的報告離子,因此只有在高分辨質(zhì)譜儀上才能完成標記定量實驗。主流儀器有Thermo fisher QE系列質(zhì)譜儀、fusion系列質(zhì)譜儀、AB sciex QTOF系列質(zhì)譜儀。
8.?我們公司的標記實驗流程?
答案:蛋白質(zhì)提取,出具蛋白質(zhì)控報告,反饋客戶,肽段酶解,多肽標記,HPLC分餾分,質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集,數(shù)據(jù)分析出具結(jié)題報告。
9.?iTRAQ&TMT?標記實驗時需注意哪些問題,對樣品有什么要求
答案:iTRAQ&TMT適用于相同組織的相對定量分析,不能進行有或無的鑒定,不能將不同的組織部位一起標記上機,更不能將不用物種的樣本一起上機;對蛋白總量需求較LFQ要高,100ug以上。
10.?不同組織類型的樣本做?iTRAQ /TMT能否同組上機?
答案:同一批上機的樣本必須是相同物種、相同組織類型才能一批上機和一起分析。搜庫時是鑒定其共有蛋白,差異分析也是共有蛋白在定量值上的差異倍數(shù)FC。如果選擇不同樣本類型的樣本,他們的特異性蛋白就會被過濾掉。
本周的FAQ就到此結(jié)束啦~
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