腫瘤個(gè)體化治療以疾病靶點(diǎn)基因診斷信息為基礎(chǔ)，以循證醫(yī)學(xué)研究結(jié)果為依據(jù)，為患者提供接受正確治療方案的依據(jù)，已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的趨勢(shì)。臨床研究證實(shí)，通過檢測(cè)腫瘤患者Th物樣本中Th物標(biāo)志物的基因突變、基因SNP分型、基因及其蛋白表達(dá)狀態(tài)來(lái)預(yù)測(cè)藥物療效和評(píng)價(jià)預(yù)后，指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療，能夠提高療效，減輕不良反應(yīng)，促進(jìn)醫(yī)療資源的合理利用。
個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)包括Sanger測(cè)序法、焦磷酸測(cè)序法（Pyrosequencing）、新一代測(cè)序（NGS）、擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)（ARMS）-PCR法、高分辨率熔解曲線（HRM）法、數(shù)字PCR（DigitalPCR）、熒光原位雜交（FISH）、免疫組化（IHC）、熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(Q-RT-PCR)等。

NGS在分子診斷中的應(yīng)用

（1）產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷：靶向區(qū)域基因組測(cè)序、大范圍基因組測(cè)序、染色體非整倍性檢測(cè)

（2）遺傳病診斷

（3）腫瘤診斷與治療

（4）植入前胚胎遺傳學(xué)診斷

（5）病原微Th物檢測(cè)

? ? ? ? ?……

什么是分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)品

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（試行），體外診斷試劑可分為I類、II類、III類，其中II類、III類要求進(jìn)行性能驗(yàn)證，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的個(gè)體戶診斷項(xiàng)目絕大多數(shù)屬于此類。

性能驗(yàn)證的內(nèi)容包括：精密度或重復(fù)性（定性和定量）、準(zhǔn)確度（定性為方法學(xué)比較或與標(biāo)準(zhǔn)樣品盤比較）、線性（定量）、可報(bào)告范圍（定量）、檢出限（定性）、參考區(qū)間（定量）、抗干擾能力等。

涉及人基因組的檢驗(yàn)項(xiàng)目包含如下質(zhì)控品：①?陰性質(zhì)控品：判斷假陽(yáng)性反應(yīng)②?陽(yáng)性質(zhì)控品：判斷假陰性反應(yīng)③?提取內(nèi)對(duì)照：監(jiān)測(cè)提取效率是否符合要求④?擴(kuò)增內(nèi)對(duì)照：監(jiān)測(cè)擴(kuò)增效率是否符合要求

什么時(shí)候需要使用診斷標(biāo)準(zhǔn)品

· 免疫組織化學(xué)參考品

·?融合基因參考品（DNA層面、RNA層面、蛋白層面）

·?基因重排參考品（DNA層面、RNA層面、蛋白層面）

·?基因突變參考品（SNV、Indel）

·?CNV參考品

·?低甲基化水平參考品

·?基因組不穩(wěn)定參考品

NGS標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的思考維度

（1）表征問題：標(biāo)準(zhǔn)品是否具有代表性，如何更具有代表性

（2）穩(wěn)定性問題：是否滿足批次內(nèi)和批次間穩(wěn)定性需求

（3）來(lái)源問題：獲取途徑的穩(wěn)定性、可追溯性、可控性及可操作性

（4）成本問題：成本的可控性

NGS標(biāo)準(zhǔn)品的分類與特點(diǎn)

（1）原始材料來(lái)源：臨床樣品；原始細(xì)胞株

（2）基因修飾材料來(lái)源

（3）不同標(biāo)準(zhǔn)品模型之間的比較

NGS標(biāo)準(zhǔn)品的模型構(gòu)建

(1）隨機(jī)修飾：VIRUS-FreeTM基因?qū)胂到y(tǒng)

優(yōu)勢(shì)：流程短，無(wú)需病毒包裝；插入片段大小不受限制；表型穩(wěn)定

劣勢(shì)：需要高效的轉(zhuǎn)導(dǎo)方式

案例：人結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116/GFP穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株?

（2）定點(diǎn)修飾：基于CRISPR介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)；適用于基因的定點(diǎn)缺失Del、定點(diǎn)插入Ins、定點(diǎn)突變SNV、拷貝數(shù)變異CNV和基因重排等。

案例：293T細(xì)胞EGFR基因V769_D770insASV點(diǎn)突變

定點(diǎn)突變方案：通過CRISPR介導(dǎo)的同源重組技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變p.V769_D770insASV (c. 2307_2308 ins GCCAGCGTG)

提升標(biāo)準(zhǔn)品模型質(zhì)量的思路與策略

（1）混合克隆 →?單克隆

（2）高代次細(xì)胞株 →?低代次細(xì)胞株

（3）病毒法 →?VIRUS-FreeTM基因?qū)胂到y(tǒng)

（4）隨機(jī)插入 →?定點(diǎn)修飾

（5）單獨(dú)構(gòu)建 →?All in one

海星生物Hycyte基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品特點(diǎn)

• 可再生

• 有類似檢測(cè)樣本的基因組復(fù)雜結(jié)構(gòu)（異質(zhì)性）

• 有明確的拷貝數(shù)和等位基因數(shù)

• 質(zhì)量高度穩(wěn)定、均一性好

• 具有臨床標(biāo)本和腫瘤細(xì)胞的特性

• 無(wú)倫理風(fēng)險(xiǎn)

海星生物專注細(xì)胞基因編輯（基因敲除\敲入\突變\過表達(dá)）十年：為基因檢測(cè)提供參考品細(xì)胞株開發(fā)，已經(jīng)和多家基因診斷公司建立合作。海星生物可以提供診斷試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品定制化服務(wù)，為客戶定制拷貝數(shù)固定（或高突變頻率）的單核苷酸變異（SNV）、堿基缺失（Deletion）、堿基插入（Insertion）、基因融合（Fusion）、拷貝數(shù)變異（CNV）等各種變異類型的標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞株，可應(yīng)用于基因檢測(cè)的上游試劑盒研發(fā)、企業(yè)參考盤注冊(cè)申報(bào)、生產(chǎn)質(zhì)檢，下游ICL的日常質(zhì)控、EQA支持。解決臨床樣本有限，稀有突變難獲得的問題。還可以訂制開發(fā)IHC（免疫組化）標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞株，解決細(xì)胞系表達(dá)豐度不穩(wěn)定，染色深淺不一的問題。此外針對(duì)腫瘤早篩甲基化檢測(cè)試劑盒，海星生物可以提供低甲基化水平DNA參考物質(zhì)。

作者：海星生物
公眾號(hào)：Cas9X細(xì)胞基因敲除
以上內(nèi)容由海星生物（http://www.cas9x.com)提供
服務(wù)內(nèi)容：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯　載體構(gòu)建/病毒包裝 PDO/動(dòng)物模型CDX　穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 干細(xì)胞/原代細(xì)胞 培養(yǎng)試劑盒?