分子生物學(xué)：從分子水平研究生命現(xiàn)象、生命本質(zhì)、生命活動(dòng)及其規(guī)律的學(xué)科。

醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)：從分子水平研究人體和疾病相關(guān)生物在正常和疾病狀態(tài)下生命活動(dòng)及其規(guī)律、從分子水平開(kāi)展人類疾病的預(yù)防、診斷和治療研究的科學(xué)。

基因：是負(fù)責(zé)編碼RNA或一條多肽鏈的DNA片段，包括編碼序列、編碼序列外的側(cè)翼序列及插入序列

結(jié)構(gòu)基因：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列。

順式作用元件：真核生物生物基因中的調(diào)控序列，包括啟動(dòng)子和上游的啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、反應(yīng)元件和poly(A)加尾信號(hào)

斷裂基因：真核生物基因在編碼區(qū)內(nèi)含有非編碼的插入序列。

基因型：是指逐代傳遞下去的成對(duì)因子的集合，因子中一個(gè)來(lái)源于父本，另一個(gè)來(lái)源于母本。

表現(xiàn)型（phenotype）：是指一些容易區(qū)分的個(gè)體特征的總和

增強(qiáng)子：一段含有多個(gè)作用元件，可以特異性的與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄活性的短的DNA序列。

轉(zhuǎn)錄：遺傳信息從DNA分子抄錄到RNA分子的過(guò)程

基因組（genome）：泛指一個(gè)細(xì)胞或病毒的全部遺傳信息。

真核生物基因組：指一套完整單倍體DNA（染色體DNA）的全部序列，既包括編碼序列，也包括大量存在的非編碼序列。

原核生物基因組結(jié)構(gòu)特征：其結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單，通常由環(huán)狀雙鏈DNA分子組成，具有操縱子結(jié)構(gòu)，基因密度高，編碼序列比例大，含有編碼同工酶的同基因，不同元和生物基因組中的GC含量變化大。其非編碼區(qū)域主要是一些調(diào)控序列，細(xì)菌的基因組可產(chǎn)生轉(zhuǎn)座現(xiàn)象，還含有可以自主復(fù)制的質(zhì)粒DNA。

真核生物基因組結(jié)構(gòu)特征：真核基因組一般比較龐大，結(jié)構(gòu)基因所占的比例小，編碼序列就更少，且存在大量重復(fù)序列。由染色體DNA和染色體外DNA組成，非編碼序列多于編碼序列，具有多基因家族和假基因

操縱子（operon）：原核生物的絕大多數(shù)結(jié)構(gòu)基因按功能相關(guān)性成簇地排列于染色體上，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動(dòng)子和操作元件）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)共同組成一個(gè)基因表達(dá)單位。

轉(zhuǎn)座因子類別及其遺傳效應(yīng)：類別：插入序列、轉(zhuǎn)座子、Mu噬菌體。遺傳效應(yīng)：①轉(zhuǎn)座因子的轉(zhuǎn)座不是本身的移動(dòng)，而是由轉(zhuǎn)座因子復(fù)制出一個(gè)新拷貝轉(zhuǎn)移到基因組中的新位置上去。②新的轉(zhuǎn)座因子轉(zhuǎn)到靶點(diǎn)后，靶點(diǎn)序列會(huì)倍增成為兩個(gè)靶點(diǎn)序列，并分別排列在轉(zhuǎn)座因子的兩側(cè)，形成同向重復(fù)序列。③在轉(zhuǎn)座過(guò)程中能夠形成共合體。④轉(zhuǎn)座因子轉(zhuǎn)座后能促使染色體畸變。⑤轉(zhuǎn)座因子可以從原來(lái)位置上切除，這個(gè)過(guò)程稱為切離。⑥轉(zhuǎn)座可引起插入突變。⑦帶有標(biāo)志基因，給受體基因組增添了新的基因。

真核生物基因組重復(fù)序列：高達(dá)總DNA量的50％。分為1）高重復(fù)序列DNA，重復(fù)次數(shù)可高達(dá)數(shù)百萬(wàn)次。有衛(wèi)星DNA和反向重復(fù)序列。衛(wèi)星DNA又分為大衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA。2）中重復(fù)序列DNA：散在分布于基因組中，約占基因組DNA總量的35％，常與單拷貝基因間隔排列

易感基因：是一些微效基因，也就是存在于QTL中的等位基因，它決定的不是疾病本身而是對(duì)疾病的遺傳易感性，是否發(fā)病取決于多遺傳因素的累加效應(yīng)和環(huán)境的相互作用

功能基因組學(xué)包括①對(duì)基因表達(dá)圖譜的研究②對(duì)基因產(chǎn)物的功能的研究③對(duì)基因組多樣性的研究④對(duì)疾病相關(guān)基因的再測(cè)序⑤單核苷酸多態(tài)性的研究

DNA損傷：DNA分子結(jié)構(gòu)（堿基、脫氧核糖、磷酸）的任何異常改變

DNA重排：DNA分子內(nèi)發(fā)生較大片段的交換，可以在同一染色體的兩條鏈間發(fā)生，也可以在不同染色體之間發(fā)生，且DNA重排可以是原來(lái)的方向或者顛倒的方向。

DNA損傷修復(fù)的主要修復(fù)方式①直接修復(fù)：最簡(jiǎn)單②切除修復(fù)：最常見(jiàn)③重組修復(fù)：損傷較多④SOS修復(fù)：損傷嚴(yán)重應(yīng)急修復(fù)。

真核生物誘導(dǎo)修復(fù)主要機(jī)制：細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制。概念：細(xì)胞周期中從DNA復(fù)制到細(xì)胞分裂每一時(shí)期轉(zhuǎn)折都會(huì)受到嚴(yán)密監(jiān)控，此機(jī)制稱細(xì)胞周期檢查點(diǎn)控制。作用：對(duì)DNA損傷做出應(yīng)答。結(jié)果：暫時(shí)阻斷細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞停滯，防止受損DNA繼續(xù)復(fù)制，同時(shí)誘導(dǎo)DNA損傷修復(fù)；若無(wú)法修復(fù)則誘導(dǎo)

細(xì)胞進(jìn)入凋亡

管家基因：在生物體的生命全過(guò)程中及幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因，這些基因的表達(dá)的量是持續(xù)的、恒定的。

誘導(dǎo)表達(dá)：在特定環(huán)境信號(hào)刺激下，有些基因的表達(dá)表現(xiàn)為開(kāi)放或增強(qiáng)，這種表達(dá)方式稱為誘導(dǎo)表達(dá)。

阻遏表達(dá)：在特定環(huán)境信號(hào)刺激下，有些基因的表達(dá)表現(xiàn)為關(guān)閉或下降，這種表達(dá)方式稱為阻遏表達(dá)。

協(xié)調(diào)表達(dá)：在生物體內(nèi)，在一定機(jī)制控制下，功能相關(guān)的一組基因，協(xié)調(diào)一致，共同表達(dá)，使各種代謝途徑有條不紊的進(jìn)行，即協(xié)調(diào)表達(dá)。

基因表達(dá)調(diào)控：根據(jù)機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖的需要，結(jié)構(gòu)基因在細(xì)胞中隨著環(huán)境的變化，有規(guī)律的選擇性、程序性、適度的表達(dá)，以適應(yīng)環(huán)境，發(fā)揮其生理功能的過(guò)程。

反式作用因子：真核細(xì)胞內(nèi)含有的主要功能是使基因開(kāi)放或關(guān)閉的一些序列特異性的DNA結(jié)合蛋白。

負(fù)調(diào)控：阻遏蛋白結(jié)合于DNA后抑制轉(zhuǎn)錄，這種基因表達(dá)調(diào)控方式稱為~

正調(diào)控：調(diào)控蛋白結(jié)合于特異DNA序列后促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄，這種基因表達(dá)調(diào)控方式稱為~

原核生物乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制：

結(jié)構(gòu)基因 ： Z基因：編碼β－半乳糖苷酶。Y基因：編碼透酶。A基因：編碼半乳糖苷乙酰化酶。調(diào)控元件：?jiǎn)?dòng)子（P），操縱元件（O），CAP結(jié)合序列 。調(diào)節(jié)基因（I）：編碼阻遏蛋白。2、功能：使細(xì)菌可以利用乳糖作為生長(zhǎng)能源。3、調(diào)控機(jī)制：1）阻遏蛋白引起的負(fù)性調(diào)節(jié)（乳糖的影響）：A.沒(méi)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子處于關(guān)閉狀態(tài)；B.當(dāng)有乳糖存在時(shí)，乳糖轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?，誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)失活，lac操縱子開(kāi)放2）CAP蛋白引起的正性調(diào)節(jié)（受葡萄糖的調(diào)節(jié)）A．CAP（正調(diào)控蛋白）：分解代謝物基因激活蛋白B．CAP是同二聚體，有DNA的結(jié)合區(qū)及cAMP的結(jié)合位點(diǎn)C. CAP與cAMP結(jié)合以后被激活D．葡萄糖濃度高時(shí)，cAMP降低；葡萄糖濃度低時(shí)，cAMP升高3）協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：A、lac操縱子中阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)和CAP蛋白的正性調(diào)節(jié)互相協(xié)調(diào)，共同調(diào)控lac操縱子。B、乳糖操縱子是弱啟動(dòng)子，與RNA聚合酶的結(jié)合必須要CAP蛋白的輔助。如果沒(méi)有CAP存在，即使沒(méi)有阻遏蛋白與操縱元件結(jié)合，操縱子仍無(wú)轉(zhuǎn)錄活性。C、當(dāng)阻遏蛋白封閉轉(zhuǎn)錄時(shí)，CAP對(duì)該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用。D、單純?nèi)樘谴嬖跁r(shí)，細(xì)菌利用乳糖作碳源，若有葡萄糖或乳糖共同存在時(shí)，細(xì)菌首先利用葡萄糖。4）乳糖操縱子協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)機(jī)制：a有葡萄糖，有乳糖，lac操縱子關(guān)閉b有葡萄糖，沒(méi)有乳糖，lac操縱子關(guān)閉c沒(méi)有葡萄糖，沒(méi)有乳糖，lac操縱子關(guān)閉d沒(méi)有葡萄糖，有乳糖，lac操縱子開(kāi)放

真核生物基因表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控：轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是真核生物基因表達(dá)調(diào)控中最重要環(huán)節(jié)。②調(diào)控作用主要是通過(guò)反式作用因子，順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來(lái)完成的。③調(diào)控方式主要是反式作用因子通過(guò)結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。其中轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成是轉(zhuǎn)錄的可調(diào)控環(huán)節(jié)。

1、?方式作用因子是調(diào)控基因表達(dá)的DNA結(jié)合蛋白

2、?方式作用因子具有三個(gè)基本特征：（1）具有三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域及結(jié)合其他蛋白結(jié)合域（2）能識(shí)別并結(jié)合基因調(diào)控區(qū)中順式作用元件（3）基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用。

3、?方式作用因子激活方式多樣：表達(dá)式調(diào)節(jié)、共價(jià)修飾、配體結(jié)合、蛋白與蛋白相互作用

4、?方式作用因子與順式作用元件結(jié)合發(fā)揮調(diào)節(jié)功能

5、?反式作用因子的組合性調(diào)控使調(diào)控更加精確。

6、?反式作用因子的作用方式有多種模式

7、?反式作用因子結(jié)構(gòu)域具有多種結(jié)構(gòu)模式

反式作用因子的基本特征和調(diào)節(jié)方式：基本特征（1）具有三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域及結(jié)合其他蛋白結(jié)合域（2）能識(shí)別并結(jié)合基因調(diào)控區(qū)中順式作用元件（3）基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用。反式作用因子與順式作用元件結(jié)合后促進(jìn)或抑制基因的表達(dá)。調(diào)節(jié)方式（1）反式作用因子與順式作用元件結(jié)合發(fā)揮調(diào)節(jié)作用（2）反式作用因子的組合性調(diào)控使調(diào)控更加精確。

?

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)——細(xì)胞通過(guò)受體接收胞外信號(hào)分子的刺激，經(jīng)過(guò)復(fù)雜的胞內(nèi)應(yīng)答反應(yīng)，影響細(xì)胞生物學(xué)功能的過(guò)程。

受體的概念——是信息分子的接收分子，它們的化學(xué)本質(zhì)是存在于細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的蛋白分子。

G蛋白循環(huán)——正常G蛋白以無(wú)活性的三聚體存在，當(dāng)配體與受體的結(jié)合改變受體構(gòu)象，再引起G蛋白構(gòu)象改變，α亞基與GDP的親和力下降，釋放GDP，與GTP結(jié)合，與βγ亞基解離，成為活化狀態(tài)的α亞基，α亞基再激活細(xì)胞內(nèi)的各種效應(yīng)分子，將信號(hào)進(jìn)一步傳遞；α亞基具有內(nèi)在GTP酶活性，將GTP水解成GDP，α亞基重新與βγ亞基結(jié)合形成三聚體，回到靜止?fàn)顟B(tài)，G蛋白這種有活性和無(wú)活性狀態(tài)的轉(zhuǎn)換稱為G蛋白循環(huán)。

細(xì)胞與細(xì)胞間的通訊方式；①細(xì)胞間隙連接通訊。②膜表面分子接觸通訊。③化學(xué)信號(hào)介導(dǎo)的通訊。

受體的作用、特點(diǎn)及分類；受體有兩個(gè)方面的作用：一是識(shí)別外源信息分子，二是將配體的信號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，傳遞至其它分子，引起細(xì)胞的應(yīng)答。受體的特點(diǎn)：高度特異性、高親和力、可飽和性、可逆性 ?受體按照其在細(xì)胞內(nèi)的位置分類：細(xì)胞表面受體和細(xì)胞內(nèi)受體

負(fù)責(zé)信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)傳遞與轉(zhuǎn)換的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子；

蛋白激酶和蛋白磷酸酶：蛋白質(zhì)活性的開(kāi)關(guān)系統(tǒng)（磷酸化和去磷酸化）

G蛋白：GTP/GDP開(kāi)關(guān)作用。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物：由銜接蛋白和支架蛋白形成

G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的基本步驟；

①配體與受體結(jié)合?②受體活化G蛋白?③G蛋白激活或抑制效應(yīng)分子?④效應(yīng)分子改變第二信使的含量與分布?⑤第二信使作用于相應(yīng)的靶分子，使之構(gòu)象改變，從而改變細(xì)胞的代謝過(guò)程及基因表達(dá)等功能。

胰島素受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要步驟。??

①受體二聚體的形成及其磷酸化?②募集街頭蛋白Grb2 ③Grb2的SH3募集SOS ④Ras的活化?⑤MAPK的級(jí)聯(lián)激活?⑥轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用

?

細(xì)胞周期——大多數(shù)真核細(xì)胞經(jīng)過(guò)一系列有序事件，使細(xì)胞體積增大，染色體復(fù)制，并且分裂成兩個(gè)各含有一套完整的染色體的子代細(xì)胞

細(xì)胞凋亡——是機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的程序化死亡過(guò)程。

細(xì)胞周期及細(xì)胞周期中的關(guān)卡；

細(xì)胞周期四個(gè)時(shí)期：G1期，S期，G2期，M期

四個(gè)關(guān)卡：G1晚期的限制點(diǎn)，G1-S轉(zhuǎn)折和G2-S轉(zhuǎn)折的DNA損傷關(guān)卡，有絲分裂中期關(guān)卡（又稱紡錘體組裝關(guān)卡）

細(xì)胞周期中關(guān)卡的作用；

G1晚期限制點(diǎn)：監(jiān)控G1期細(xì)胞大小及環(huán)境中是否有生長(zhǎng)因子，細(xì)胞生長(zhǎng)大足夠大；

G1-S處關(guān)卡：監(jiān)控DNA是否損傷；

G2-M處關(guān)卡：監(jiān)控DNA是否損傷及DNA是否已正確、完全的復(fù)制；

有絲分裂中期關(guān)卡：監(jiān)控姐妹染色體是否已穩(wěn)定地附著在紡錘體上。

細(xì)胞周期的調(diào)控蛋白質(zhì)；

（1）周期蛋白；（2）周期蛋白依賴性激酶；?（3）周期蛋白-周期蛋白依賴性激酶抑制因子（CKI）；?(4) RB及E2F-DP1轉(zhuǎn)錄因子?；（5）調(diào)節(jié)Cdk磷酸化和去磷酸化的蛋白激酶和磷酸酶；（6）泛素和使蛋白質(zhì)泛素化的酶。

凋亡途徑中的胱天蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)；

Egl----抑制---Ced9---抑制---Ced4---活化---Ced3---凋亡

細(xì)胞調(diào)亡的形態(tài)學(xué)變化；

由于細(xì)胞縮小而喪失與周圍細(xì)胞接觸，染色質(zhì)固縮在核膜附近，細(xì)胞骨架崩解，核膜消失，DNA斷裂成片段，細(xì)胞膜起泡，最終細(xì)胞解體為許多由細(xì)胞膜包裹的凋亡小體，并被周圍的健康細(xì)胞或吞噬細(xì)胞吞噬。

細(xì)胞凋亡與細(xì)胞死亡的區(qū)別。

最重要的區(qū)別就是凋亡過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)自始自終并無(wú)外流，很少引起炎癥反應(yīng)；壞死過(guò)程中細(xì)胞腫脹、破裂、內(nèi)容物外流而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，

基因工程：將基因進(jìn)行克隆，利用克隆基因表達(dá)，制備特定的蛋白或多肽產(chǎn)物或定向改造細(xì)胞乃至生物個(gè)體特性所用的方法及相關(guān)工作。

DNA重組：不同來(lái)源的DNA分子通過(guò)末端共價(jià)連接，形成重新組合的DNA分子的過(guò)程。

克隆載體：攜外源DNA入宿主細(xì)胞實(shí)現(xiàn)外源DNA的克隆和擴(kuò)增的載體。

質(zhì)粒：存在于包括細(xì)菌，酵母在內(nèi)的多種微生物中，在宿主細(xì)胞的染色體外以穩(wěn)定的方式遺傳。

轉(zhuǎn)化：指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主菌，并使其獲得新的表型的過(guò)程。

轉(zhuǎn)導(dǎo)：用噬菌體或細(xì)胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息的轉(zhuǎn)移過(guò)程。

轉(zhuǎn)染：真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型過(guò)程。

表達(dá)系統(tǒng)：通過(guò)導(dǎo)入目的基因從而獲得所需要的蛋白或多肽片段，包括表達(dá)載體及表達(dá)構(gòu)件。

限制性核酸內(nèi)切酶及其識(shí)別位點(diǎn)特征: 具有回文序列結(jié)構(gòu)

質(zhì)粒載體應(yīng)該具備的特性：1.分子量相對(duì)較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。2.具有一個(gè)以上的遺傳標(biāo)志。3.具有多個(gè)限制性內(nèi)切酶的單一切點(diǎn)，便于外源基因的插入。

基因工程技術(shù)的基本過(guò)程：1.制備目的基因和相關(guān)載體。2.將目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接。3.將重組的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。4.DNA重組體的篩選和鑒定。5.DNA重組體的擴(kuò)增，表達(dá)和其他研究。

表達(dá)載體: ?用來(lái)在受體細(xì)胞中表達(dá)（轉(zhuǎn)錄和翻譯）外源基因的載體。

基因組文庫(kù):?指將某種生物的整個(gè)基因組DNA切割成大小合適的片段，并將所有這些片段都與適當(dāng)?shù)妮d體連接，引入相應(yīng)的宿主細(xì)胞中保存和擴(kuò)增,所獲得的重組子群體的總稱。

CDNA文庫(kù):?將生物特定的組織器官或特定發(fā)育時(shí)期的全部mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，各cDNA分別插入載體形成重組子，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞克隆擴(kuò)增。這些重組子內(nèi)的cDNA的集合即cDNA文庫(kù)。?

DNA連接酶及其在基因工程中的主要用途

DNA連接酶是能催化雙鏈DNA片段靠在一起的3’羥基末端與5’磷酸基團(tuán)末端之間通過(guò)形成磷酸二脂鍵，使兩末端連接的一種核酸酶。 它能連接目的基因和載體從而構(gòu)成重組子。

DNA聚合酶I在基因工程中的主要用途

1. ?5’—3’DNA聚合酶活性。2. ?5’—3’外切酶活性。 3. 3’— 5’外切酶活性

基因突變的概念，類型及其遺傳性效應(yīng)

基因突變：在基因的特定DNA序列中，其堿基組成及排列順序可因機(jī)體內(nèi)外因素的作用發(fā)生改變，導(dǎo)致DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，改變基因結(jié)構(gòu)，形成基因突變。包括: 點(diǎn)突變，缺失，插入，倒位，配子突變和體細(xì)胞突變，動(dòng)態(tài)突變。

其遺傳性效應(yīng)：1.基因突變引起遺傳密碼的改變（錯(cuò)義突變，無(wú)義突變，同義突變，移碼突變）2.基因突變影響hnRNA的剪切。

功能克隆及定位克隆的概念

功能克隆：利用蛋白質(zhì)的表達(dá)及功能信息分離未知基因的方法叫未知基因的功能克隆。

定位克隆：利用基因在染色體的位置信息分離鑒定未知基因的策略。

基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)與疾病的研究策略

1.通過(guò)結(jié)構(gòu)分析確定基因變異在疾病發(fā)生中的作用。2.通過(guò)基因表達(dá)水平分析確定基因在疾病發(fā)生中的作用。3.通過(guò)功能學(xué)研究確定基因在疾病中的作用。

功能克隆及定位克隆的方法

功能克隆：1.通過(guò)純化蛋白質(zhì)的氨基酸序列信息分離鑒定未知基因。2.通過(guò)蛋白質(zhì)的抗原抗體反應(yīng)分離鑒定未知基因。3.通過(guò)mRNA的差異分離鑒定未知基因。

定位克隆1.用遺傳分析和染色體斷裂點(diǎn)分析對(duì)疾病基因定位?2.利用HGP數(shù)據(jù)進(jìn)行靶區(qū)域的基因組分析?3.通過(guò)編碼序列篩選鑒定基因?4.采用突變分析技術(shù)篩選致病突變

基因診斷的基本技術(shù)：核酸分子雜交和PCR擴(kuò)增

基因診斷：利用分子生物學(xué)技術(shù)，從DNA/RNA水平檢測(cè)基因的存在，分析基因的結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài)，從而對(duì)疾病作出診斷。

Southern印跡：用于DNA的檢測(cè)，不但能檢測(cè)出特異的DNA片段，還能進(jìn)行定位和測(cè)定分子量，可用于基因的限制性內(nèi)切酶圖譜分析、基因突變分析等。

Northern印跡:雜交用于RNA的檢測(cè)，能對(duì)組織細(xì)胞中總RNA或mRNA進(jìn)行定性和定量分析

斑點(diǎn)雜交:既可檢測(cè)DNA也可檢測(cè)RNA，用于基因組中特定基因及其表達(dá)的定性和定量分析，方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、樣品用量少；缺點(diǎn)是不能鑒定所分析基因的分子量，特異性較低、有一定比例的假陽(yáng)性。

原位雜交：是細(xì)胞學(xué)技術(shù)與核酸雜交結(jié)合的一種核酸分析檢測(cè)技術(shù)。用標(biāo)記核酸探針與細(xì)胞涂片、壓片、細(xì)胞懸液滴片或組織切片上具有互補(bǔ)序列的單鏈DNA或RNA進(jìn)行雜交，然后通過(guò)放射自顯影或酶底物顯色或激發(fā)熒光等方法檢測(cè)待測(cè)核酸分子。

限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性：基因突變導(dǎo)致的基因堿基組成或（和）順序發(fā)生改變，會(huì)在基因結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生新的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)或使原有的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)消失。因此，突變基因在經(jīng)過(guò)相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶水解后，其電泳條帶的數(shù)量和大小就會(huì)發(fā)生改變，根據(jù)這些改變可以判斷出突變是否存大。

對(duì)不同的疾病需要采用不同的基因診斷策略：對(duì)致病基因已經(jīng)找到、發(fā)生機(jī)制也基因清楚的疾病，可以通過(guò)直接檢測(cè)致病基因進(jìn)行基因診斷；對(duì)致病基因還沒(méi)有找到、發(fā)生機(jī)制不清，但致病基因已經(jīng)定位于染色體或基因組的特定區(qū)域的疾病，可以通過(guò)檢測(cè)致病基因的連鎖遺傳標(biāo)記進(jìn)行基因診斷；對(duì)過(guò)些多因素、多基因疾病，則要通過(guò)檢測(cè)表型克隆基因進(jìn)行基因診斷；還有的疾病可能并沒(méi)有基因結(jié)構(gòu)的變異，但由于受內(nèi)外環(huán)境因素影響，其表達(dá)發(fā)生了改變，導(dǎo)致相應(yīng)蛋白質(zhì)過(guò)多或過(guò)少而引起的疾病，就需要通過(guò)基因表達(dá)的定量分析進(jìn)行基因診斷。

???????????????通過(guò)致病基因的檢測(cè)診斷疾病

???????????????通過(guò)連鎖遺傳標(biāo)志檢測(cè)診斷疾病

???????????????通過(guò)表型克隆建立疾病基因診斷指標(biāo)

???????????????通過(guò)基因表達(dá)的定量分析診斷疾病

遺傳標(biāo)記的選擇一般遵守的兩條基本原則：1、多標(biāo)記原則（要求選擇多個(gè)與致病基因連鎖的遺傳標(biāo)記，這樣可以增加信息量，提高間接基因診斷結(jié)果的可靠性）2、近距離原則（要求首選位于基因內(nèi)的遺傳標(biāo)記，基因外遺傳標(biāo)記由于離致病基因較遠(yuǎn)，有可能發(fā)生基因重組而影響判斷的可靠性）

基因診斷技術(shù)檢測(cè)腫瘤：1、檢測(cè)腫瘤染色體異位及融合基因。2、檢測(cè)癌基因和抑癌基因。3、檢驗(yàn)?zāi)[瘤相關(guān)病毒。4、檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物基因或mRNA。

基因治療：是指將目的基因?qū)氚屑?xì)胞內(nèi)，成為宿主細(xì)胞遺傳物質(zhì)的一部分，目的基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)疾病起治療作用。

基因置換：或稱基因矯正是，是指將特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞，通過(guò)定位重組，以導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因。基因置換的目的是糾正缺陷基因，將缺陷基因的異常序列進(jìn)行矯正，對(duì)缺陷基因的缺陷部位進(jìn)行精確的原位修復(fù)，不涉及基因組的任何改變。

針對(duì)不同疾病可以采用不同的基因治療策略：1、基因置換可以矯正缺陷基因。2、基因添加使細(xì)胞表達(dá)原來(lái)不能表達(dá)的蛋白。3、基因干預(yù)是抑制特定基因的表達(dá)。4、導(dǎo)入自殺基因可產(chǎn)生細(xì)胞自殺效應(yīng)。5、基因修飾能夠改變細(xì)胞的功能特性。

反義RNA：是指與mRNA互補(bǔ)的RNA分子，也包括其它RNA互補(bǔ)的RNA分子。

RNA干擾：指短雙鏈RNA誘導(dǎo)的同源mRNA的降解過(guò)程，從而抵制該基因的表達(dá)。

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