Detroit R&D?生物靶標(biāo)20-HETE-ELISA試劑盒（#20HG1）用于測定生物樣品中的20-HETE（也稱為20-OH-AA）水平。使用真實的20-HETE和一組脂肪酸來研究20-HETE ELISA的特異性，基于它們的結(jié)構(gòu)，可以預(yù)期與20-HETE競爭結(jié)合20-HETE的抗體?？?0-HETE與14,15-和11,12-DHETs、PGE2沒有交叉反應(yīng)，即使與結(jié)構(gòu)極其相似的花生四烯酸（AA）、亞油酸和亞麻酸ELISA分析?？紤]到20-HETE和AA之間的唯一區(qū)別是氧分子底特律研發(fā)20-HETE ELISA是一個驚喜。

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人類原發(fā)性和鹽敏感性高血壓與細(xì)胞色素P450的AA代謝差異有關(guān)（CYP）4A，具有AA-ω-羥化酶（20-HETE合成）活性。循環(huán)胰島素增加抑制20-肥胖高血壓受試者的HETE合成。?

最近，CYP4F2基因變異增加了尿20-HETE的分泌，被發(fā)現(xiàn)與中國人群患高血壓的風(fēng)險。

該試劑盒可用于測定促滲后血清、血漿、細(xì)胞和組織中的20-HETE和純化。

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保存：如果所有組件在使用前都儲存在適當(dāng)?shù)臏囟认?，該套件將獲得較佳的效果。項目應(yīng)在收到此試劑盒后在指定溫度下儲存。所有部件都儲存在-20°C以下，并且不應(yīng)在必要時再次冷凍和解凍。

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艾美捷Detroit R&D?生物靶標(biāo)20-HETE-ELISA試劑盒樣品制備：

表達(dá)細(xì)胞色素P450（CYP）4A/4F的細(xì)胞中的20-HETE測量

1.使用含有最終濃度的約0.1 mM TPP（三苯基膦，0.03-0.05 mg/mL）。TPP是一種抗氧化劑，看起來像沉淀在樣品中，因為它不容易溶解。在使用包含TPP，旋轉(zhuǎn)樣品以從樣品溶液中分離沉淀的TPP。

2.用乙酸將整個均化的細(xì)胞酸化至約3-4的pH。測量使用標(biāo)準(zhǔn)pH紙。

3.用乙酸乙酯萃取。向均質(zhì)細(xì)胞中加入等體積的乙酸乙酯渦流非常好。離心后，將上層有機相放入新鮮干凈的試管中。然后添加將另一等體積的乙酸乙酯加入均化細(xì)胞中，開始第二次提取。它是強烈建議進行三次提取。

4.從提取物中蒸發(fā)合并的乙酸乙酯，直到所有乙酸乙酯都在氬氣或氮氣下干燥氣體

5.皂化（如需要）

6.加入20μL N，N-二甲基甲酰胺（DMF），使干燥的殘留物溶解，用于重建。添加0.5 mL 1x樣品稀釋緩沖液（試劑盒中提供）制成溶液。在每個孔中加載100μL，以三份的形式在ELISA板上。（注意：我們建議在嘗試將結(jié)果擬合到標(biāo)準(zhǔn)曲線。例如，用50μL的剩余樣品加上3個孔50μL的1x樣品稀釋緩沖液，以及3個孔，其中10μL的其余樣品加上90μL的1x

樣品稀釋緩沖液。）

7.對20-HETE進行ELISA（根據(jù)制造商的說明）。

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組織中的20-HETE測量：

1.將1g組織、4mL H2O和0.01mg TPP均勻化。

2.通過向每個勻漿中加入8μL乙酸來酸化勻漿。

3.用等量的乙酸乙酯提取，徹底渦旋，向下旋轉(zhuǎn)，收集有機物階段再重復(fù)兩次提取，將所有有機相合并。

4.用氬氣或氮氣干燥有機相。

5.皂化（如果需要）（參見細(xì)胞中的20-HETE測量）

6.用N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶解來自上述步驟#4的干燥殘留物。（添加約20μL的DMF以重新構(gòu)成干燥的殘留物。）

7.用1x樣品稀釋緩沖液進一步稀釋：加入約0.5 mL 1x樣品稀釋劑緩沖并在室溫下以10000rpm離心5分鐘。上清液將用于ELISA。

8.?對20-HETE進行ELISA（根據(jù)制造商的說明）

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血漿或血清中20-HETE的測量以下是使用1.0mL液體的起始體積測量血漿或血清中20-HETE的方案。啟動也可以使用低于1.0mL的體積（例如，用于小鼠研究），通過制作適當(dāng)?shù)膶λ畜w積和稀釋度進行比例調(diào)整。

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Detroit R&D專注于心血管疾病、癌癥的研究，診斷和治療領(lǐng)域。涉及環(huán)境健康科學(xué)、高血壓、乳腺癌和前列腺癌相關(guān)研究領(lǐng)域。艾美捷科技是Detroit R&D的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。