CellTracker Blue CMAC Dye（藍(lán)色活細(xì)胞熒光探針）是一種非常適合監(jiān)測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)或位置的熒光染料。CellTracker Blue CMAC 熒光染料可自由穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為不透細(xì)胞膜的反應(yīng)產(chǎn)物。 該染料可轉(zhuǎn)移到子細(xì)胞中，但不會(huì)轉(zhuǎn)移到群體中的相鄰細(xì)胞中。 CellTracker Blue CMAC 染料設(shè)計(jì)為顯示至少 72 小時(shí)的熒光，該染料具有理想的示蹤特性：在工作濃度下穩(wěn)定、無毒、在細(xì)胞中保留良好，在生理 pH 值下發(fā)出明亮的熒光。 此外，CellTracker Blue CMAC 染料的激發(fā)和發(fā)射光譜與 GFP（綠色熒光蛋白）和 RFP（紅色熒光蛋白）光譜完全分離，可進(jìn)行多路復(fù)用。

圖1：CellTracker Blue CMAC結(jié)構(gòu)式

CellTracker Blue CMAC優(yōu)勢(shì)

?易于使用—去除培養(yǎng)基，添加染料，孵育30分鐘，進(jìn)行細(xì)胞成像
? 熒光信號(hào)保留 >72 小時(shí)（通常3至6代）
? 適用于多通路技術(shù)的藍(lán)色激發(fā)/發(fā)射光譜（最大值為 353/466 nm）
? 低細(xì)胞毒性—不影響活力或增殖

實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 使用無水 DMSO 將 CMAC 固體溶解，配制成 10 mM 的儲(chǔ)存液。使用無血清的培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前將工作液置于 37℃進(jìn)行預(yù)熱。
2. 根據(jù)不同的細(xì)胞類型在不同的細(xì)胞培養(yǎng)條件下孵育 15~45 分鐘。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心棄上清，收集細(xì)胞沉淀。用預(yù)熱的染色液重懸細(xì)胞；對(duì)于貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到合適的細(xì)胞密度，移除上清培養(yǎng)液，加入預(yù)熱的染色液。
3. 移除染色液，加入新鮮預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)基，37℃孵育 30 分鐘。
4. 對(duì)于懸浮細(xì)胞，吸取 5 μl 左右染色后的細(xì)胞滴至載玻片上，加蓋蓋玻片，置于熒光顯微鏡下觀察；對(duì)于貼壁細(xì)胞，直接觀察即可。（可選）如需固定細(xì)胞，可先跳過步驟 4，待固定步驟完成后再做觀察準(zhǔn)備。
5. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。
6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定細(xì)胞，室溫孵育 15 分鐘。
7. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。
8. 如果需要可對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行透化處理。當(dāng)細(xì)胞需要進(jìn)行抗體標(biāo)記時(shí)，細(xì)胞膜的透化處理是有必要的，便
于促進(jìn)抗原進(jìn)入細(xì)胞?？梢允褂帽浔幚砑?xì)胞 10 分鐘，可以提供細(xì)胞的滲透性。

圖2：CellTracker 藍(lán)色、綠色和紅色染料進(jìn)行多色圖像分析