Rat Crp Elisa 試劑盒

欣協(xié)生物生產(chǎn)地Rat CRP ELISA檢測(cè)試劑盒是用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中 CRP的專(zhuān)用試劑盒，本試劑盒操作方便簡(jiǎn)單，可直接用于樣本分析，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高。

檢測(cè)原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA。用抗大鼠CRP單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板，加入適度稀釋的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的CRP會(huì)與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗大鼠CRP抗體，抗大鼠CRP抗體與結(jié)合在單抗上的大鼠CRP結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有CRP，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變黃。在450nm下測(cè)OD值，CRP濃度與OD450值之間呈正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 計(jì)算出標(biāo)本中CRP濃度。

試劑盒組分

存儲(chǔ)條件

以上存儲(chǔ)條件均要求在試劑盒保質(zhì)期內(nèi)。

其他材料

1、酶標(biāo)儀(450nm)

2、高精度可調(diào)移液器及吸頭: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μl; 一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器

3、自動(dòng)洗板機(jī)或洗瓶

4、37℃溫箱

5、雙蒸水或去離子水、吸水紙、量筒

樣本處理及保存方法

血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，收集血液后，室溫凝血30min，1000×g離心10min，小心分離血清。

血漿：用EDTA、檸檬酸鹽、肝素作為抗凝劑收集血漿，收集后30min內(nèi)以1000×g離心15min去除顆粒。

細(xì)胞上清液：1000×g離心10min去除顆粒和聚合物。

保存：若樣品不立即檢測(cè)，請(qǐng)將其按一次用量分裝，-20℃至-70℃保存，避免反復(fù)凍融。盡量避免使用溶血或高血脂樣本。如果血清中含有大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾去除；室溫下解凍，請(qǐng)勿于37℃或更高的溫度加熱解凍。

稀釋?zhuān)?/strong>可根據(jù)實(shí)際情況，將標(biāo)本做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)) 。

注：正常人血清或血漿樣本建議做1:2稀釋

操作步驟

1、按照上述準(zhǔn)備工作配制好各種溶液。

2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量和標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，并增加1孔作為空白對(duì)照孔。分別將標(biāo)本和不同濃度 標(biāo)準(zhǔn)品(100μl /孔)加入相應(yīng)孔中（零孔只加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液），用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育90 分鐘。

3、洗板4次：(1)自動(dòng)洗板機(jī)：要求注入的洗滌液為350μl，注入與吸出間隔15-30秒。(2)手工洗板：甩盡孔內(nèi)液 體，每孔加洗滌液350μl，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。

4、加入生物素化抗體工作液(100μl /孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育60分鐘。

5、洗板4次。

6、加入酶結(jié)合物工作液(100μl /孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育30分鐘。

7、洗板4次。

8、加入顯色劑100μl /孔，避光，37℃孵箱孵育8-20分鐘。

9、加入終止液100μl /孔，混勻后即刻測(cè)量OD450值(5分鐘內(nèi))。

注：空白對(duì)照孔只加顯色劑和終止液，如用450nm/630nm雙波長(zhǎng)讀數(shù)，無(wú)需做空白對(duì)照。OD值 =OD450-OD630。

判斷結(jié)果

1、每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值，如果做復(fù)孔，求其平均值。

2、使用計(jì)算機(jī)軟件以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y)，相應(yīng)的CRP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)，生成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（建議用4參數(shù)曲線(xiàn)擬合），樣品的CRP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。

3、若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)算標(biāo)本含量。

4、參考數(shù)據(jù)：（數(shù)據(jù)僅供參考，不同用戶(hù)最佳顯色時(shí)間會(huì)有所不同）

結(jié)果重復(fù)性

板間，板內(nèi)變異系數(shù)均＜10%。

靈敏度

最低檢測(cè)大鼠CRP劑量小于150pg/ml。最低檢出量測(cè)定方法：20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)的平均OD值增加兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，再 計(jì)算相應(yīng)的濃度。

特異性

此試劑盒可檢測(cè)天然和重組的大鼠CRP，以100ng/ml平行做特異性試驗(yàn)，均不與下列細(xì)胞因子及蛋白反應(yīng)。

注意事項(xiàng)

1、試劑盒保存在2-8℃，除復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品，其它成分不可冷凍。

2、濃縮生物素化抗體(2a)、濃縮酶結(jié)合物(3a)裝量極少，運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。使用前請(qǐng)離心處理以使附著于管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。

3、為避免交叉污染請(qǐng)使用一次性吸頭。

4、終止液和顯色劑具腐蝕性，避免皮膚及粘膜直接接觸，一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用大量水沖洗。

5、使用干凈的塑料容器配制洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7、不要用其它來(lái)源的試劑混合或替代該產(chǎn)品的組分，不同批號(hào)的試劑盒組份不能混用，請(qǐng)?jiān)谟行掌趦?nèi)使用本 產(chǎn)品。

8、在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙復(fù)孔或三復(fù)孔，加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔孵育的時(shí) 間一樣。

9、充分混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率進(jìn)行振蕩)。

10、避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥，干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成分迅速失活，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

11、適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚箻悠分德湓跇?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍內(nèi)，根據(jù)待測(cè)因子含量高、中、低的不同，建議采用1:100, 1:10, 1:2稀釋樣品。如果樣品OD值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，適當(dāng)增加稀釋度并重復(fù)檢測(cè)。

12、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、操作人、移液方式、洗滌方法、孵育時(shí)間及溫度、試劑盒批次的不同均可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的差異。

13、此法可有效的消除可溶性受體、結(jié)合蛋白以及生物樣品中的其他因素的干擾。