泛素化修飾是蛋白翻譯后的一種修飾方式，指小分子多肽泛素(Ubiquitin, Ub)在相關(guān)酶的作用下通過共價鍵連接在底物蛋白或目標(biāo)蛋白上的過程。泛素化修飾主要介導(dǎo)蛋白質(zhì)發(fā)生降解，但隨著蛋白泛素化修飾的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)泛素化修飾還可以參與調(diào)節(jié)其他的生命活動，例如細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄激活、基因沉默以及免疫應(yīng)答等。?

那么如何檢測靶蛋白是否發(fā)生了泛素化修飾呢？?

蛋白質(zhì)泛素化修飾檢測的內(nèi)容包括樣品蛋白質(zhì)是否發(fā)生泛素化、發(fā)生何種泛素化以及有多少蛋白質(zhì)發(fā)生泛素化等。目前，蛋白泛素化檢測的方法主要有基于特異抗體和基于質(zhì)譜的兩種鑒定方法。

基于特異抗體的方法如染色質(zhì)免疫共沉淀、Western免疫印跡等，其基本原理相似，都是將樣品蛋白進(jìn)行提取、純化、分離，再與抗體進(jìn)行特異性結(jié)合并進(jìn)行顯色拍照，最后分析蛋白質(zhì)泛素化的情況。?

由于正常生理狀態(tài)下蛋白質(zhì)泛素化的程度較低，在利用質(zhì)譜方法進(jìn)行鑒定前，通常要將樣品蛋白進(jìn)行酶解，再用特異性識別抗體對泛素化的蛋白進(jìn)行富集，然后進(jìn)行質(zhì)譜分析，最后對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫比對分析和生物信息學(xué)分析來定性和定量鑒定蛋白泛素化。?

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