? ? ? ?酵母菌是多形的、不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)已有明顯的分化，菌體比細(xì)菌大。繁殖方式也較復(fù)雜，無(wú)性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過(guò)接合產(chǎn)生子囊孢子。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用美藍(lán)染色浸片來(lái)觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。

? ? ? ?美藍(lán)為無(wú)毒性染料，其氧化型為藍(lán)色，而還原型為無(wú)色。用它對(duì)酵母菌染色時(shí)，由于活細(xì)胞的新陳代謝作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無(wú)色；對(duì)于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無(wú)此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。

? ? ? ?微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物細(xì)胞個(gè)體較小，需要在顯微鏡下借助于特殊的測(cè)量工具—測(cè)微尺來(lái)測(cè)定其大小。測(cè)微尺包括鏡臺(tái)測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺。先用絕對(duì)長(zhǎng)度的鏡臺(tái)測(cè)微尺來(lái)校正不表示絕對(duì)長(zhǎng)度的目鏡測(cè)微尺，計(jì)算后者每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后放上待測(cè)的標(biāo)本，用目鏡測(cè)微尺測(cè)定標(biāo)本上微生物細(xì)胞占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，就可計(jì)算該微生物的大小。酵母菌的直徑約8-10μm。

? ? ? ?鏡臺(tái)測(cè)微尺是一張中央部分刻有精確等分線的載玻片，專門用于校定目鏡測(cè)微尺每小格的相對(duì)長(zhǎng)度。通常，刻度的總長(zhǎng)是1mm，被等分為100格，每格0.01mm（即10μm）。鏡臺(tái)測(cè)微尺不直接用來(lái)測(cè)量細(xì)胞的大小。

? ? ? ?目鏡測(cè)微尺是一塊可以放入接目鏡的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，有等分為50小格和100小格的兩種。在測(cè)量時(shí)將接目測(cè)微尺放在目鏡的隔板上，即可來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。也有專用的目鏡，里面已經(jīng)安放好了目鏡測(cè)微尺。

? ? ? ?由于目鏡測(cè)微尺所測(cè)量的是經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象，因此，在不同的顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合下放大倍數(shù)不同，目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也不一樣。所以，在用目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物大小之前，必須先用鏡臺(tái)測(cè)微尺校定目鏡測(cè)微尺，以確定該顯微鏡在特定放大倍數(shù)的目鏡和物鏡下，目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后根據(jù)微生物細(xì)胞相當(dāng)于的目鏡測(cè)微尺格數(shù)，計(jì)算出微生物細(xì)胞的實(shí)際大小。

菌種:

試劑:

器材:

實(shí)驗(yàn)方法:

1 .測(cè)微尺的構(gòu)造和使用方法

(1) 目鏡測(cè)微尺的構(gòu)造

目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確的刻度，通常是將5mm劃分為50格，實(shí)際每格等于100μm。刻度的大小是隨使用的目鏡和物鏡的放大倍數(shù)而改變，用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺來(lái)標(biāo)定。

(2) 鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造

鏡臺(tái)測(cè)微尺為一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。圓圈內(nèi)刻有分度，將長(zhǎng)1mm的直線等分為100小格，每小格等于10μm。2. 目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定

(1)取下目鏡，旋下目鏡上的目透鏡，將目鏡測(cè)微尺放人接目鏡的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透鏡，并裝入鏡簡(jiǎn)內(nèi);

(2)將鏡臺(tái)測(cè)微尺置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上，同觀察標(biāo)本一樣，使具有刻度的小圓圈位于視野中央 ；

(3)先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，待看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線；

(4) 記錄二條重合線間的目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。

3. 酵母菌大小的測(cè)定

? ? ? ?目鏡測(cè)微尺標(biāo)定完畢后，取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上微生物標(biāo)本片，將其固定在載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到標(biāo)本片圖象，然后根據(jù)不同的微生物對(duì)象分別轉(zhuǎn)換到高倍鏡下，用目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物細(xì)胞的直徑或?qū)捄烷L(zhǎng)所占的格數(shù)，再依據(jù)所標(biāo)定的高倍鏡每一格的實(shí)際長(zhǎng)度計(jì)算細(xì)胞的實(shí)際大小。

? ? ? 通常測(cè)定對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體來(lái)代表該菌的大小，為了盡量減小實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)在同一標(biāo)本片上測(cè)量10~20個(gè)細(xì)胞，取其平均值作為該菌的大小。

4. 實(shí)驗(yàn)完畢后的處理

? ? ? ?測(cè)量完畢，換上原有顯微鏡目鏡（或取出接目測(cè)微尺，目鏡放回鏡筒），用擦鏡紙將測(cè)微尺擦拭干凈后放回盒內(nèi)保存，并按照顯微鏡的使用和維護(hù)方法擦拭物鏡。

10倍鏡下目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定

(1)鏡臺(tái)測(cè)微尺→置于顯微鏡的載物臺(tái)上→同觀察標(biāo)本一樣→動(dòng)橫、縱移動(dòng)手柄→具有刻度的小圓圈位于視野中央。

(2)轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器到10倍鏡鏡頭→轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋→轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋→將光圈調(diào)到（10×） →調(diào)到看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度。

(3)轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡→使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行→使兩尺的左邊第一條線相重合→再向右尋找兩尺的第二條重合線。

(4)計(jì)算：目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度=兩個(gè)重疊刻度間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10μm／兩個(gè)重疊刻度間目鏡測(cè)微尺格數(shù)

40倍鏡下目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定

(1)轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器到40倍鏡鏡頭→轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋→將光圈調(diào)到（40×）附近→調(diào)到看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度。

(2)轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡→使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行→使兩尺的左邊第一條線相重合→再向右尋找兩尺的第二條重合線

(4)計(jì)算：目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度=兩個(gè)重疊刻度間物鏡測(cè)微尺格數(shù)×10μm／兩個(gè)重疊刻度間目鏡測(cè)微尺格數(shù)

5.酵母菌形態(tài)觀察

⑴ 菌種：酵母菌

⑵在載玻片中央加一滴呂氏堿性美藍(lán)染色液，用接種環(huán)取酵母菌菌苔少許與美藍(lán)液混合均勻；

⑶用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上； 將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。

（2)混合和固定酵母菌

(3)開(kāi)始鏡檢

打開(kāi)顯微鏡先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并根據(jù)顏色區(qū)別死活細(xì)胞。

6、酵母菌大小的測(cè)定

取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上微生物標(biāo)本片，測(cè)量微生物細(xì)胞的直徑或?qū)捄烷L(zhǎng)所占的格數(shù)。

注意事項(xiàng):

1．加染液不宜過(guò)多或過(guò)少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液會(huì)溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。

?2．蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。