iTRAQ、TMT、Label-Free
研究蛋白質(zhì)含量的技術(shù)主要分為標(biāo)記和非標(biāo)記兩種策略,其中iTRAQ和TMT為體外標(biāo)記蛋白定量,Label-Free為非標(biāo)記定量技術(shù)。
iTRAQ/TMT/Label-Free是三種不同的蛋白定量技術(shù):
iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)即同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù)。iTRAQ技術(shù)通過同位素標(biāo)記來實現(xiàn)蛋白質(zhì)定量研究,經(jīng)水解的蛋白質(zhì)多肽N末端或賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán)可以被同位素標(biāo)記,通過高精度質(zhì)譜儀串聯(lián)分析,可同時對最多8個樣品進(jìn)行鑒別和定量。利用iTRAQ技術(shù)一次實驗可實現(xiàn)多達(dá)8個樣品蛋白質(zhì)的高通量鑒定和定量,且該技術(shù)是在肽段水平上進(jìn)行的體外標(biāo)記,沒有物種特異性限制,理論上可用于所有物種的蛋白質(zhì)定量研究。
TMT(Tandem Mass Tag)中文名串聯(lián)質(zhì)量標(biāo)簽,其原理與iTRAQ基本相似,利用氨基酸N末端和賴氨酸殘基與試劑標(biāo)簽之間形成共價結(jié)合實現(xiàn)對多肽的標(biāo)記,然后通過串聯(lián)質(zhì)譜獲得的離子峰強度和離子峰質(zhì)荷比進(jìn)行蛋白質(zhì)的定性和定量分析。一次TMT最高可同時標(biāo)記16種不同的生物樣品,與iTRAQ相比,TMT的通量更高;TMT報告基團(tuán)間最小分子質(zhì)量差為6/1000Da,iTRAQ報告基團(tuán)間最小分子質(zhì)量差為1Da,因此TMT比iTRAQ具有更高的分辨率,降低了實驗誤差。
Label Free蛋白定量技術(shù),是將未標(biāo)記的樣品蛋白進(jìn)行酶解,再將酶解得到的肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,利用質(zhì)譜分析軟件對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析以計算蛋白質(zhì)的含量。可通過一級質(zhì)譜得到的肽段峰強度、肽段峰面積以及液相色譜保留時間等數(shù)據(jù)信息來進(jìn)行樣品蛋白的定量分析。Label Free無需使用昂貴的試劑標(biāo)簽就可以對樣品進(jìn)行高通量的定量分析,投入產(chǎn)出比較高。此外,在鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾時,->A:/label-free.html
百泰派克生物科技采用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀結(jié)合Nano-LC,提供基于Label-Free的定量蛋白質(zhì)分析服務(wù)技術(shù)包裹,您只需要將您的實驗?zāi)康母嬖V我們并將您的蛋白寄給我們,我們會負(fù)責(zé)項目后續(xù)所有事宜,包括蛋白酶切、肽段標(biāo)價、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。