超靈敏細胞計數(shù)試劑盒-8（CCK-8）通過利用高度水溶性的四唑鹽-WST-8進行非常方便的測定。WST-8被細胞中的脫氫酶還原，產(chǎn)生橙色產(chǎn)物（甲贊），可溶解在組織培養(yǎng)基中。CCK-8是非放射性的，允許在細胞增殖和細胞毒性測定中進行靈敏的比色測定，以測定活細胞的數(shù)量。細胞中甲酰胺的含量與活細胞的數(shù)量成正比，可用于檢測細胞增殖和細胞毒性。使用CCK-8的檢測靈敏度高于使用其他四氮唑鹽如MTT、XTT、MTS或WST-1的檢測靈敏度。

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艾美捷超敏型細胞增殖檢測試劑（CCK-8）：

Cat #: D-AKE106

Size: 1000T / 10000T

Storage: Stored at 4°C for 12 months, and at -20°C for at least 24 months, protected fromlight

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超敏型細胞增殖檢測試劑（CCK-8）化驗程序

注：在實際實驗之前，做一個預實驗，以確定合適的細胞數(shù)量和培養(yǎng)

時間如果OD值過高，可以適當減少細胞數(shù)量，加入CCK-8的孵育時間

可以縮短或者可以減少CCK-8的裝載量。

一、標準曲線繪制

1.用細胞儀計數(shù)制備的細胞懸浮液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2.用培養(yǎng)基稀釋細胞，按順序形成細胞濃度梯度，通常為5-7個細胞濃度梯度、每個濃度梯度4-6個多孔。

3.接種后，將粘附細胞或懸浮細胞孵育0.5-4h，每100μL培養(yǎng)基加入10μL CCK-8試劑孵育一定時間，然后測量ODaso值。以單元格數(shù)為x軸，以ODaso值為y軸，繪制標準曲線。根據(jù)該標準曲線，可以確定未知樣品中細胞的數(shù)量。使用該標準曲線的前提條件是試驗條件完全相同。

l細胞活性測定方案

1.在96孔板中接種細胞懸浮液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放入濕潤的二氧化碳培養(yǎng)箱中進行預培養(yǎng)。

2.在板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入井內(nèi)，因為它們會干擾外徑讀數(shù)。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4小時。培養(yǎng)時間取決于實驗條件，如細胞類型和細胞密度。

4.使用微孔板讀數(shù)器測量450 nm處的吸光度。

II細胞增殖和細胞毒性測定方案

1.在96孔板中分配100μL細胞懸浮液（5000個細胞/孔）。將平板在除濕二氧化碳培養(yǎng)箱中預孵育24小時。

2.將1-10μL不同濃度的待測物質(zhì)加入平板中。

3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)適當?shù)臅r間長度（例如，6、12、24或48小時）。

4.在板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入井內(nèi)，因為它們會干擾外徑讀數(shù)。

5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4小時。培養(yǎng)時間取決于實驗條件，如細胞類型和細胞密度。

6.使用微孔板讀數(shù)器測量450 nm處的吸光度。

數(shù)據(jù)分析

細胞活力=[（A-As）/（Ac-Ao）]×100%

抑制率=[（A-A?)/（Ac-Aa）]×100%

A： 實驗孔的吸光度（包括細胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液和藥物溶液）；

Ac：對照孔的吸光度（包括細胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液，不含藥物）；

An：空白孔的吸光度（包括培養(yǎng)基、CCK-8溶液，不含細胞和藥物）。

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注意事項：

1.由于CCK-8的低毒性，CCK-8檢測后的細胞可用于其他細胞測定。

2.如果OD值過低，請在加入CCK-8后適當增加細胞數(shù)量或延長培養(yǎng)時間。

3.試劑盒依賴于脫氫酶催化的反應，影響活細胞脫氫活性的條件或化學物質(zhì)會干擾檢測。如果培養(yǎng)基的顏色或pH因長期培養(yǎng)而發(fā)生變化，請在添加CCK-8時更換培養(yǎng)基。

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FAQ：

1.本品敏感，OD值偶爾偏高。我們應該如何處理？

從三個方面進行調(diào)整：

1）使用不同數(shù)量的細胞進行檢測，制作標準曲線，確定合適的細胞數(shù)量；

2）縮短CCK-8的孵育時間；

3）減少CCK-8的裝載量，將CCK8稀釋至合適的濃度使用。

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2.如何確定該產(chǎn)品的檢測范圍？

建議制作不同細胞數(shù)的標準曲線，并根據(jù)穩(wěn)定的線性趨勢確定特定細胞的檢測間隔。

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3.如何設置細胞毒性測試？

有兩種設置方式：

1）在100μL細胞懸浮液中加入1-10μL不同濃度的待測物質(zhì)，孵育適當時間，然后加入10%的系統(tǒng)溶液。

2）在藥物暴露于細胞一段時間后，使用10%CCK-8檢測細胞增殖。