單克隆抗體作為一類新型治療劑，可通過特異性靶向抗原來治療包括癌癥在內(nèi)的各種疾病。隨著研究的不斷深入，兔單抗展現(xiàn)出越來越多的優(yōu)勢，證實其臨床應用潛力在某些方面優(yōu)于鼠單抗。有研究人員在2010年制備了一組針對VEGFA的兔源中和抗體。他們將候選藥物人源化，但保留了其親本生物特性。與已經(jīng)上市的貝伐珠單抗相比，人源化的兔單抗在小鼠體內(nèi)對抑制H460肺癌和A673橫紋肌肉瘤異種移植物的生長更有效，展示了人源化兔單抗作為治療藥物的潛力。2019年10月8日，F(xiàn)DA批準通過了首個兔源單克隆抗體藥物（為scFv抗體片段），即用于治療濕性年齡相關(guān)性黃斑變性（wet-AMD）的Beovu?（brolucizumab）注射劑。2020年2月，全球首款全長兔單抗體藥物Vyepti上市，用于預防性治療成人偏頭痛。

兔單抗的獨特優(yōu)勢

高親和力

高親和力是兔單抗的首要標簽。對于抗體藥物來說，一般認為解離系數(shù)達到納摩爾級即為親和力高。兔單抗的高親和力與其獨特的免疫親和成熟過程有關(guān)，其解離系數(shù)甚至可達到皮摩爾級。

多樣性豐富

大多數(shù)抗體制備的策略是基于從脾臟、骨髓或血液中回收的B淋巴細胞，由于兔子的整體體型較大，其可回收的B淋巴細胞數(shù)量較小鼠多50倍左右，這為抗體篩選提供了更大的候選庫。同時，兔子與小鼠、人類產(chǎn)生抗體庫的免疫機制不同，除了體細胞超突變（SHM）機制外，還可以通過體細胞基因轉(zhuǎn)換（SGC）引入額外的抗體多樣性。

靈敏度與特異性

兔屬兔形目，其在進化上不同于小鼠和大鼠等嚙齒目動物。兔抗能夠識別對嚙齒目動物不具有免疫原性的人類抗原表位，增加可靶向表位的總數(shù)并促進產(chǎn)生可與人類抗原同源的小鼠抗原發(fā)生交叉反應的抗體。

其次，兔子可以對小分子和半抗原產(chǎn)生強烈的免疫反應，而這在嚙齒動物中并不常見。有研究認為，近交系動物通常會使免疫反應多樣性降低，小鼠大多數(shù)為近交品系，這使得抗體先導分子的發(fā)現(xiàn)變得更加困難。而兔的近交品系較少。

結(jié)構(gòu)穩(wěn)定

兔單抗90%-95%的輕鏈為κ1，其VL和CL之間存在鏈內(nèi)二硫鍵，輕鏈結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。同時，兔IgG沒有亞類，N末端和D-E環(huán)中具有較少的氨基酸，易于分子克隆和工程設計，更適于抗體藥物開發(fā)。

兔單抗在臨床免疫診斷試劑和抗體治療藥物的雙軌發(fā)展，使其制備需求直線上升，兔單抗發(fā)現(xiàn)技術(shù)路線也開始備受關(guān)注。

1）雜交瘤細胞

早在1995年，Knight通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將c-myc和v-abl兩個癌基因引入兔子體內(nèi)，就已經(jīng)成功制造出兔雜交瘤細胞用來生產(chǎn)兔單克隆抗體，但是用細胞系制備的雜交瘤細胞不穩(wěn)定且抗體產(chǎn)出量低。再者雜交瘤細胞可能會丟失或者退化，重新制備雜交瘤細胞系不僅費時費力，而且與之前的細胞系之間還是存在差異。

2）噬菌體展示技術(shù)

受限于融合效率、基因組穩(wěn)定性，以及最主要的專利限制，兔單抗無法得到大規(guī)模的應用。隨著噬菌體展示為代表的展示技術(shù)及單B細胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)的出現(xiàn)，為兔單抗在診斷與治療領域的應用得到了更好的發(fā)展。

噬菌體展示技術(shù)是一種用于識別蛋白質(zhì)和其他大分子配體的體外篩選技術(shù)，其依賴原核生物轉(zhuǎn)錄與翻譯機制，與真核生物抗體表達存在差異，且重鏈輕鏈隨機配對，后續(xù)需要進一步的改造與親和力成熟。

3）單B細胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)

單B細胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)直接從免疫兔的脾臟、外周血獲得B淋巴細胞，從B細胞中獲得抗體基因片段，通過細胞表達進行單克隆抗體生產(chǎn)。單B細胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)保留了抗體重鏈和輕鏈的自然同源配對，具有基因多樣性好、生產(chǎn)效率高、時間周期短等優(yōu)勢，是現(xiàn)階段抗體藥物研發(fā)先導抗體分子發(fā)現(xiàn)中優(yōu)勢最為明顯的技術(shù)路線。

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德泰SingleB?快速發(fā)現(xiàn)平臺

德泰生物SingleB?快速發(fā)現(xiàn)平臺，無需兔骨髓瘤細胞商業(yè)化授權(quán)，可直接對抗原特異性記憶B細胞和漿細胞進行篩選：記憶B細胞篩選利用細胞表面Marker及抗原篩選出特異性記憶B細胞；漿細胞高通量篩選利用DeepLight? On-chip Cell Screening平臺前置binding-blocking功能篩選，更快鎖定陽性克隆，節(jié)省研發(fā)時間和費用。

抗體先導分子發(fā)現(xiàn)快至48天，可交付＞50株經(jīng)FACS Assay功能驗證的抗體，為抗體藥物的研發(fā)提供了極大的便利。

兔單抗SingleB?快速發(fā)現(xiàn)具體流程：

高效率：從免疫到獲得抗體序列快至48天，比傳統(tǒng)雜交瘤快100天。

無商業(yè)化限制：直接篩選B細胞，無雜交瘤商業(yè)化限制。

高交付：至少交付50株FACS Binder，儲存數(shù)百株陽性克隆。

雙保障：漿細胞與記憶B細胞雙篩選雙保障，確保交付高品質(zhì)。

高概率：保證交付序列的多樣性，抗體獨特表位發(fā)現(xiàn)概率更高。

案例展示

1）記憶B細胞篩選

2）漿細胞篩選

3）抗體功能驗證

4）抗體多樣性分析

參考文獻

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