一：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1、購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株及其使用說明書

2、按照說明書準(zhǔn)備所需要的實(shí)驗(yàn)耗材

3、大致梳理實(shí)驗(yàn)流程，方便實(shí)驗(yàn)思路清晰，記錄實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。

二：菌株活化

按照說明書活化菌株，如下圖：

打開安培瓶，用無菌吸管將腦心浸液培養(yǎng)基加入凍干菌種中，混合均勻，將菌懸液吸出接種于哥倫比亞血平板中，于36℃厭氧培養(yǎng)72h。

備注：本實(shí)驗(yàn)室購買FSCC137003(ATCC13124)

三：實(shí)驗(yàn)操作

1、將哥倫比亞血平板中的菌株接種于SPS平板中，標(biāo)準(zhǔn)上說明產(chǎn)期莢膜梭菌在SPS平板上需要36℃厭氧培養(yǎng)24h，菌落形態(tài)為黑色。事實(shí)上厭氧效果不達(dá)標(biāo)，SPS平板上菌落形態(tài)難以呈黑色。如下圖：

備注：

為了呈現(xiàn)黑色菌落，PO主查閱了相關(guān)文獻(xiàn):

可以在SPS平板上覆蓋一層，以達(dá)到厭氧環(huán)境，使菌落更呈深灰色。po主所在實(shí)驗(yàn)室用日本產(chǎn)的厭氧產(chǎn)氣盒和厭氧產(chǎn)氣袋以達(dá)到更好厭氧效果。為了呈現(xiàn)黑色菌落，特意將一個(gè)厭氧袋增加到兩個(gè)，以達(dá)到厭氧環(huán)境。

SPS平板中呈現(xiàn)黑色菌落，其形成原理是：SPS即亞硫酸鹽-多粘菌素B-磺胺嘧啶瓊脂，產(chǎn)氣莢膜梭菌可以還原亞硫酸鹽為硫醚，硫醚可以與檸檬酸鐵銨反應(yīng)呈黑色。查詢文獻(xiàn)所知，增加亞硫酸鹽的量和檸檬酸鐵銨的量，可以增強(qiáng)黑色。

2、將SPS平板中中的菌落分別接種于FT培養(yǎng)基中，于36℃培養(yǎng)24h。
觀察形態(tài)：有絮狀物產(chǎn)生、菌液混濁，產(chǎn)生大量氣泡。如下圖：

備注：

配制FT培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意滅菌后迅速冷卻，以達(dá)到厭氧效果。

標(biāo)準(zhǔn)沒有說明36℃培養(yǎng)需要厭氧，樓主這里做了對(duì)比，實(shí)驗(yàn)證明厭氧培養(yǎng)與未厭氧對(duì)實(shí)驗(yàn)影響較小。

四：生化反應(yīng)：

1、鏡檢
產(chǎn)期莢膜梭菌為革蘭氏陽性粗大桿菌，觀察鏡檢形態(tài)。如下圖：

2、動(dòng)力-硝酸鹽實(shí)驗(yàn)
用接種針穿刺動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基，于36℃厭氧培養(yǎng)24h。產(chǎn)氣莢膜梭菌無動(dòng)力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。如下圖：

3、牛奶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)
取FT培養(yǎng)液1ml接種于含鐵牛奶培養(yǎng)基中，于46℃水浴培養(yǎng)2h，產(chǎn)氣莢膜梭菌能發(fā)酵乳糖、凝固酪蛋白并大量產(chǎn)氣，呈“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象，但培養(yǎng)基不變黑。如下圖：

4、卵磷脂分解實(shí)驗(yàn)
用接種針取FT培養(yǎng)液點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板，于36℃厭氧培養(yǎng)24h。產(chǎn)氣莢膜梭菌會(huì)產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵黃中的卵磷脂，接種點(diǎn)底部及周圍形成乳白色的渾濁帶。如下圖：

五：參考為獻(xiàn)

1. GB8538-2016?食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法
2. 劉沛 何艷玲主編.北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司.《食品安全導(dǎo)刊》2013年第3期
3. 姚積源主編.上海市疾病預(yù)防控制中心培養(yǎng)室.上海201204

文章來源：“食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)”公眾號(hào)，作者~。
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