熒光標(biāo)記活細胞標(biāo)記膜前體蛋白/熒光標(biāo)記βγ-cat蛋白/熒光標(biāo)記連接蛋白
淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)酶解過程,構(gòu)建含有Swedish和APP717兩種突變的熒光真核表達系統(tǒng).方法以pcDNA3.0-APP為模板,通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)得到含有APP717突變的APP最后300個堿基片段(C99);以pcDNA3.0-CFP—CaM-YFP酶切產(chǎn)物為模板,通過PCR分別得到編碼藍色熒光蛋白(CFP)和黃色熒光蛋白(YFP)堿基序列;生物合成含有Swedish突變的APP中間54個堿基片段(54bp).利用基因工程技術(shù)將CFP,54bp,YFP,C99片段克隆至載體質(zhì)粒pcDNA3.0中,通過酶切,PCR,測序鑒定最終得到重組質(zhì)粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP.
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結(jié)果：(1)基因序列分析證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功.(2)利用多光子共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細胞,顯示融合基因能夠準確表達藍色和黃色熒光.(3)表達CFP-54bp—YFP的細胞有FRET現(xiàn)象,而表達CFP-54bp-YFP-C99的細胞中觀察不到FRET現(xiàn)象.(4)利用多光子共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)CFP-54bp-YFP-C99轉(zhuǎn)染的細胞中有YFP標(biāo)記的Aβ產(chǎn)生并沉積在胞質(zhì)胞膜以及細胞間隙中.(5)免疫細胞化學(xué)檢測證實CFP-54bp-YFP—C99經(jīng)過裂解可以產(chǎn)生Aβ,Aβ在細胞膜,細胞質(zhì),細胞間隙聚集沉積.
熒光標(biāo)記重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白
熒光標(biāo)記GSTP1蛋白
熒光標(biāo)記乳蛋白
熒光標(biāo)記抗原蛋白
熒光標(biāo)記納米顆粒包被哈氏弧菌抗原蛋白TssJ
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星戈瑞熒光2022.8
