近年來(lái)，人體組織再生和修復(fù)領(lǐng)域得到了廣泛的關(guān)注。越來(lái)越多的研究機(jī)構(gòu)和企業(yè)開(kāi)始投入到相關(guān)領(lǐng)域的研究和開(kāi)發(fā)中。HSF人皮膚成纖維細(xì)胞作為一種重要的細(xì)胞類(lèi)型，將成為市場(chǎng)上的熱門(mén)產(chǎn)品。

基本信息

細(xì)胞名稱(chēng)：HSF人皮膚成纖維細(xì)胞

組織來(lái)源：皮膚

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

支原體：無(wú)

背景簡(jiǎn)介：該細(xì)胞系來(lái)源于一男性的皮膚組織，利用原代外植體方法提取原代細(xì)胞，轉(zhuǎn)染含有SV40大T抗原的病毒建立的永生化人皮膚成纖維細(xì)胞系。

相較于原代細(xì)胞，該細(xì)胞系具有更穩(wěn)定的連續(xù)增殖能力，可利用組織工程技術(shù)與其他細(xì)胞一同構(gòu)建3D皮膚模型，在體外構(gòu)建高度類(lèi)似于人體皮膚的活性組織，是體外檢測(cè)皮膚的核心工具，不僅可以避免動(dòng)物實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的局限性，而且可以更加高效準(zhǔn)確以及科學(xué)的評(píng)估化妝品的安全性。

常用于皮膚老化、傷口愈合、基因傳遞和硬皮病等皮膚疾病的研究，還可應(yīng)用于化妝品對(duì)皮膚刺激及修復(fù)的檢測(cè)。

細(xì)胞形態(tài)

細(xì)胞特點(diǎn)

1. 分泌功能

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞具有很強(qiáng)的分泌能力。它們能夠合成和分泌大量的膠原蛋白、彈力蛋白等結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)是構(gòu)成皮膚組織的重要組成部分。通過(guò)分泌這些蛋白質(zhì)，HSF人皮膚成纖維細(xì)胞能夠幫助修復(fù)受損的皮膚組織，促進(jìn)傷口愈合，并且保持皮膚的彈性和緊致度。

2. 增殖功能

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞還具有較高的增殖能力。它們可以通過(guò)不斷地進(jìn)行有絲分裂來(lái)增加自身數(shù)量，并填補(bǔ)受損區(qū)域。這種增殖能力使得HSF人皮膚成纖維細(xì)胞在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中扮演著重要角色，確保了新生組織的形成和完整性。

3. 免疫調(diào)節(jié)功能

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞還具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。它們可以釋放一系列的生物活性物質(zhì)，如細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和促進(jìn)組織修復(fù)。這種免疫調(diào)節(jié)功能對(duì)于皮膚組織的抗炎、抗感染等方面具有重要意義。

總之，HSF人皮膚成纖維細(xì)胞在皮膚組織中承擔(dān)著多種重要功能。它們通過(guò)分泌結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、增殖能力和免疫調(diào)節(jié)等方式，參與了皮膚組織的修復(fù)和保持健康。對(duì)于了解皮膚生理學(xué)以及相關(guān)疾病的治療和預(yù)防具有重要意義。

材料準(zhǔn)備

儀器

離心機(jī)、顯微鏡、計(jì)數(shù)器、水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱

試劑

HSF專(zhuān)用消化液Ⅰ、PBS磷酸緩沖液、0.25%胰蛋白酶溶液、HSF專(zhuān)用培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞凍存液

耗材

培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、T75培養(yǎng)瓶、槍頭、離心管、移液管

操作步驟

01

細(xì)胞復(fù)蘇

將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4 mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

02

細(xì)胞傳代

如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1 mL 消化液于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2 mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8 mL 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

03

細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1 mL 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1 mL 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1 mL 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和無(wú)血清細(xì)胞凍存液，輕輕混勻，無(wú)血清細(xì)胞凍存液最終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ mL，每支凍存管凍存 1 mL 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

免疫熒光檢測(cè)

▲經(jīng)免疫熒光鑒定，該細(xì)胞純度達(dá)到 99%以上

▲HSF細(xì)胞成長(zhǎng)記錄

HSF細(xì)胞的應(yīng)用

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞是一種多形態(tài)、無(wú)色透明的細(xì)胞，形狀呈長(zhǎng)梭形或星形。細(xì)胞體積較大，約為10-30微米。成纖維細(xì)胞主要分布于真皮和皮下結(jié)締組織中，是皮膚組織中最常見(jiàn)的細(xì)胞類(lèi)型之一。

成纖維細(xì)胞的主要功能是合成和分泌膠原蛋白，這是皮膚組織的重要結(jié)構(gòu)蛋白，負(fù)責(zé)維持皮膚的彈性和穩(wěn)定性。膠原蛋白是一種具有高度有序的三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，它構(gòu)成了皮膚的主要支撐結(jié)構(gòu)，為皮膚提供了強(qiáng)度和彈性。在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中，成纖維細(xì)胞還參與了膠原蛋白的再生和重建，并促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。

除了合成膠原蛋白，成纖維細(xì)胞還分泌一系列的細(xì)胞外基質(zhì)分子，如彈性纖維素、透明質(zhì)酸等，這些分子在維持皮膚組織的結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)揮著重要的作用。成纖維細(xì)胞還可以分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等，參與皮膚的免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程。

除了以上的功能，成纖維細(xì)胞還具有一定的分化能力。在某些特殊情況下，如組織損傷或病理狀態(tài)下，成纖維細(xì)胞可以發(fā)生分化，轉(zhuǎn)化為其他細(xì)胞類(lèi)型。例如，在皮膚創(chuàng)傷愈合過(guò)程中，成纖維細(xì)胞可以分化為肌肉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，以促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)和再生。

總結(jié)

HSF人皮膚成纖維細(xì)胞是一種重要的細(xì)胞類(lèi)型，主要分布于人體皮膚組織中。它的主要功能是合成和分泌膠原蛋白，維持皮膚的結(jié)構(gòu)和功能。此外，成纖維細(xì)胞還參與了創(chuàng)傷愈合、免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程，并具有一定的分化能力。HSF人皮膚成纖維細(xì)胞在研究皮膚生物學(xué)、創(chuàng)傷愈合、組織工程等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

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