實驗室對蛋白樣品中二硫蘇糖醇DTT殘留含量的色譜檢測方法
二硫蘇糖醇(簡稱為DTT),外觀為白色粉末,是一種小分子有機還原劑,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構象穩(wěn)定性,被廣泛應用于細胞生物學、生物化學和生物醫(yī)學應用領域,可作為巰基化DNA的還原劑和去保護劑,蛋白質中雙硫鍵的還原等,有著較為廣泛的應用。
但是需要注意二硫蘇糖醇(DTT)還原性較強,在臨床和實驗領域可能會破壞蛋白質結構從而引起酶失活現(xiàn)象,造成生物分子的氧化損傷因此有必要對要藥品中的二硫蘇糖醇(DTT)含量進行檢測??紤]到二硫蘇糖醇(DTT)容易被氧化,響應不穩(wěn)定等性質,實驗室需開發(fā)一種滿足要求的檢測方法。
查閱文獻資料分享一種利用超高效液相色譜UPLC檢測二硫蘇糖醇(DTT)含量的辦法。配制DTT標準品水溶液;樣品濾液;超純水作為空白溶液;DTT標準品、樣品濾液和超純水中加入過量的Cu(NO3)2混勻后獲得混合物進行UPLC分析,獲得DTT峰;將標準品水溶液獲得的DTT峰面積相對DTT濃度繪制標準曲線,利用外標法根據測得的DTT峰面積對樣品中殘留的DTT進行濃度定量。
超高效液相色譜是一種基于小顆粒填料的液相色譜系統(tǒng),支持更高的壓力,更準確的流路體積控制,更好的線性,更高的靈敏度。在分離能力,靈敏度和專屬性等方面有著巨大優(yōu)勢,近年在藥物分析研究領域中得到了越來越多的應用。
如果是蛋白中二硫蘇糖醇的殘留檢測,還可以通過液質聯(lián)用的方法,利用強大的定性定量能力對實現(xiàn)精準程度更高的檢測,實驗室可根據不同檢測需求目的提供相應檢測方案,實驗室按照GMP要求進行相關管理,擁有光譜質譜色譜波譜等百余臺精密檢測設備,可對不同樣品中的二硫蘇糖醇(DTT)含量進行測定。
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