代謝組學（Metabolomics）通過對生物體內所有代謝物進行定量分析，研究代謝物與生理病理變化的相對關系，是系統(tǒng)生物學的重要組成部分。合理的樣本收集作為開啟代謝組學項目的第一步，是決定研究結果真實、可靠的關鍵性因素。下面小編將從樣本收集原則，不同類型樣本的收集流程及常見問題來進行詳細闡述，以供辛勤耕耘在科研前線的您查閱。

1、樣本收集原則

• 一致性：除變量外，每組樣本在取材部位、時間及處理條件等方面盡可能保持一致。

• 代表性：正確識別并選取關注部位，避免雜質污染。

• 迅速性：在樣本采集、制備、凍存的過程中簡化不必要的步驟，盡可能減少操作時長。

• 全程低溫：樣本離體后，如有分離步驟在4℃或冰上進行，分離好的樣本立即置于液氮中速凍，-80℃保存，干冰運輸。

• 樣本足量：應檢測要求、生物信息學分析要求及項目結果準確性等，各個類型樣本的送樣量及生物學重復最好大于其對應的建議量。

2、不同類型樣本收集流程

（一）血清/血漿

收集流程：

1、將血液收集在不加抗凝劑的血清管（紅帽）中，37℃（或室溫）靜置1-2 h進行凝固分層/將血液收集在含有抗凝劑的血漿管（紫帽）中，立即輕輕顛倒混勻，盡快血漿分離；

2、3000 rpm 4°C離心10 min，取上清轉移至干凈的離心管中；

3、12000 rpm 4°C離心10 min，取上清分裝至1.5 mL離心管中，每管保持有0.2-1 mL；

4、-80°C凍存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、取血時如用酒精消毒，請擦干擦拭部位，待酒精完全揮發(fā)后再取樣。

2、在選擇抗凝管時，推薦EDTA作為血漿抗凝劑。

3、采集到的血清、血漿樣本應該是淡黃色透明或者半透明液體，如果發(fā)現(xiàn)樣本為紅色，則說明在樣本采集過程中出現(xiàn)了溶血現(xiàn)象，建議重新制備樣本（溶血易引起苯丙氨酸、鳥氨酸、檸檬酸、琥珀酸、磷脂以及鞘脂等多種代謝物的改變）。

4、推薦盡量多的收集樣本并分裝凍存。

5、血清參考產率：30% ~ 50%；血漿參考產率：≈ 50%。

（二）尿液

收集流程：

1、將晨起中段尿（臨床）或晨間1 h尿（動物）直接分裝到離心管中，每管1 mL；

2、1000 rpm 4℃離心5 min，取上清液，液氮速凍；或0.22 μm濾膜過濾，取上清液，液氮速凍，-80°C凍存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、動物1 h尿量不夠，可分多次收集，如果需要收取24 h尿液，請使用帶有低溫裝置的代謝籠收取。

2、尿液放置在室溫條件（4℃）不超過8h。

（三）動物組織

收集流程：

1、首先準備好用于包裝樣本的鋁箔或凍存管，并且用油性記號筆在鋁箔或凍存管表面多處寫明樣本編號；

2、準確切除所需組織后，立即剔除結締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型，并迅速將目標組織分割成小塊；

3、在生理鹽水或PBS中迅速漂洗樣本，以去除血漬和污物；

4、用鑷子夾取樣本置于液氮中冷凍處理15 min；

5、將組織裝入準備好的鋁箔或凍存管內，立即液氮速凍或-80℃冰箱凍存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、在樣本收集過程中，注意避免反復凍融。

2、對于類似斑馬魚大腦、小鼠海馬組織等單個實驗動物組重量遠低于50 mg的情況，可根據(jù)課題需求，將多份樣本混合為一個樣品。

3、對于珍貴樣本，建議進行樣本備份。

（四）糞便/腸道內容物

收集流程：

1、收集到新鮮糞便或腸道內容物樣本后，將樣本分裝為200 mg/管；

2、立即液氮速凍處理15 min，保存至-80°C冰箱，足量干冰寄送。

注意事項：

1、由于糞便/腸道內容物中有非常多的微生物，而微生物的代謝速度非常快，故所有的步驟需要盡快完成，且避免反復凍融。

2、對于單個樣本量大的糞便樣本，將收集到的新鮮糞便在低溫儲存前就用無菌棒混勻，取適合的量儲存；而單個樣本量少的樣本，可以整個儲存，后續(xù)檢測時再混勻，以此排除不同部位采樣對實驗結果的影響。

（五）植物組織

收集流程：

主要為葉片、莖、花、根、果實和種子：

1、取整片葉片/一段莖/一朵花/整株植物的根部/一顆果實/細小的顆粒種子，根部需要迅速用PBS漂洗掉泥土等雜質，部分果實需要切塊，細小的顆粒種子需要將同組的種子混勻；

2、放入離心管或錫箔紙中，標記，迅速放入液氮中冷凍處理至少15min；

3、取出后迅速放入自封袋中（每組一袋），并放入標簽紙注明樣本信息；

4、-80℃凍存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、采集葉片樣本時，最好在中午光照好的時間收集。

2、對多汁的果實進行取樣時，為保持均一性（如番茄、皮、果肉、果瓤、籽的占比），建議將整個果實進行研磨、凍干，粉末稱重后分裝。

3、根部、果實和種子推薦保存至離心管中，而不是錫箔紙包裹。

（六）細胞 ?

收集流程：

1、懸浮細胞

1)采集適量細胞懸濁液于15mL無菌離心管中；

2)1000 g 4℃低速離心10 min，去上清液；

3)加入適量預冷PBS清洗2次，1000 g 4℃低速離心10 min，去上清液；

4)再次用預冷PBS清洗，并對含PBS細胞懸液進行計數(shù)；

5)取1*10^7 cell/sample細胞懸液于1.5mL無菌離心管中；

6)1000 g 4℃低速離心10 min，去上清液；

7)保留離心管底部細胞樣本，液氮速凍5 min，-80℃保存，足量干冰寄送。

2、貼壁細胞

1)采用胰酶消化或細胞鏟鏟取后，轉移至15mL離心管中；

2)1000 g 4℃離心5 min，去上清液；

3)加入適量PBS清洗2-3次，4000 g 4℃離心5 min，去上清液；

4)再次用預冷PBS清洗，并對含PBS細胞懸液進行計數(shù)；

5)取1*10^7 cell/sample細胞懸液于1.5mL無菌離心管中；

6)1000 g 4℃低速離心10 min，去上清液；

7)保留離心管底部細胞樣本，液氮速凍5 min，-80℃保存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、當去上清后，繼續(xù)貼壁吸取5 s以保證上清被完全去除，防止其回落給后續(xù)操作帶來負面影響。

2、上述整個操作過程盡量快速完成，以免代謝物產生變化。

3、送樣前需準確計數(shù)，以保證樣本量一致。

（七）微生物

收集流程：

1、采集適量菌液于無菌離心管中；

2、4000 g 4℃下離心3 min，去除上清液；

3、用預冷PBS溶液清洗菌體2次，4000 g 4℃下離心3 min，去除上清液；

4、保留底部菌體沉淀，液氮速凍，-80°C保存，足量干冰寄送。

注意事項：

1、微生物的代謝速度非常快，故所有的步驟需要盡快完成。

2、不同樣本間的起始菌體數(shù)量需要保持一致。

3、部分研究會同時查看胞內和胞外代謝物情況，這時需要同步保留上清液和菌體細胞沉淀。

3、送樣量建議

4、常見問題

1、代謝組學要求組內生物學重復是多少？

動物樣本建議每組不少于10個，臨床樣本建議每組不少于30個，細胞、微生物及植物樣本建議每組不少于6個。生物重復數(shù)的不足，不構成檢測的技術障礙，主要是會影響后續(xù)數(shù)據(jù)分析的可靠性，一定數(shù)量的樣本才能代表總體。

2、代謝組學分批次送樣是否能合并分析？

代謝組檢測樣本單獨上機，由于質譜不同時間段內質譜的靈敏度、響應強度會有一定的差異，從樣本處理到質譜檢測過程中每一步驟都可能會影響到代謝物鑒定的種類和定量值，因此強烈建議非靶向代謝不要分批次送樣，不同批次數(shù)據(jù)由于存在差異不能一起分析。

3、檢測多個項目要準備多份樣本嗎？

是的，特別是靶向定量檢測，每個項目都會消耗一定量的樣本。

以上就是對代謝組學研究常見樣本收集的簡單介紹啦，若您的樣本不在上述范圍內可與小編聯(lián)系哦！