腸肽酶（Enterokinase，EC 3.4.21.9）是一種絲氨酸蛋白酶，參與胰蛋白酶原向胰蛋白酶的激活，進(jìn)而導(dǎo)致各種消化酶的激活。它識(shí)別一個(gè)高度特異的氨基酸序列“DDK”，并在賴氨酸殘基后裂解。腸肽酶的高比活性已被用于切割含有上述識(shí)別基序的多種天然或融合蛋白標(biāo)簽。在PRSS7活性檢測(cè)試劑盒（熒光法）中，我們使用了一種含有腸肽酶識(shí)別序列的肽底物以及熒光標(biāo)簽“AFC”。腸肽酶催化該底物的裂解并釋放AFC分子，可通過(guò)測(cè)量其在Ex/Em=380/500 nm處的熒光來(lái)輕松量化AFC分子。該檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)單、快速，可檢測(cè)低至1mU的腸肽酶活性。

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MyBioSource??艾美捷?腸激酶活性檢測(cè)試劑盒--利用含有腸激酶特異性識(shí)別序列且?guī)в蠥FP熒光標(biāo)記的多肽底物，在腸激酶的催化作用下，該多肽底物被裂解，并釋放AFC分子，繼而通過(guò)測(cè)量其在Ex/Em = 380/500 nm的熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè)腸激酶活性的目的。

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AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線（a）。用人腸肽酶檢測(cè)試劑盒（b）的靈敏度。按照試劑盒方案進(jìn)行分析。

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MyBioSource?艾美捷該試劑盒化驗(yàn)程序：

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1.AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線：通過(guò)向90μl腸肽酶分析緩沖液中添加10μl 1 mM AFC標(biāo)準(zhǔn)溶液，將AFC標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至100μM（100 pmol/μl）。將0、2、4、6、8和10μl稀釋的100μM AFC標(biāo)準(zhǔn)加入96孔板中的一系列孔中，以生成0、200、400、600、800和1000 pmol/孔的AFC標(biāo)準(zhǔn)。用腸肽酶分析緩沖液將最終體積調(diào)節(jié)至100μl。

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2.樣品制備：在96孔板的每個(gè)孔中加入1-50微升具有腸肽酶活性的樣品。將5-10μl腸肽酶（陽(yáng)性對(duì)照）添加到所需孔中。用腸肽酶分析緩沖液將陽(yáng)性對(duì)照和樣品孔的最終體積調(diào)節(jié)至50μl。平行制備帶有50μl腸肽酶分析緩沖液的底物背景控制井和帶有樣品+腸肽酶分析緩沖液的樣品背景控制井。

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3.反應(yīng)混合物：混合足夠多的試劑，以滿足要進(jìn)行的分析數(shù)量。對(duì)于每個(gè)孔（樣品、陽(yáng)性對(duì)照和背景對(duì)照），制備50μl混合物，其中包含：

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Enteropeptidase Assay Buffer?48 μl?50 μl

Enteropeptidase Substrate?2 μl?---

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4.測(cè)量：室溫下培養(yǎng)30-60分鐘，在Ex/Em=380/500 nm下測(cè)量熒光。

注：培養(yǎng)時(shí)間取決于樣品中的腸肽酶活性。建議在動(dòng)力學(xué)模式下測(cè)量熒光，并在線性范圍內(nèi)選擇兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)（T1和T2）來(lái)計(jì)算樣品的腸肽酶活性。AFC標(biāo)準(zhǔn)曲線可在終點(diǎn)模式下讀?。丛谂囵B(yǎng)時(shí)間結(jié)束時(shí)）。

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