善待生命！常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物指導(dǎo)方針：采血/麻醉/安樂(lè)死
之前看過(guò)一篇這樣的報(bào)道：
國(guó)內(nèi)一位科研人員向《Scientific Reports》投稿遭拒。拒稿原因是該項(xiàng)研究在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，使用水合氯醛麻醉，而該物質(zhì)作為麻醉劑，更應(yīng)該是鎮(zhèn)靜劑，使用時(shí)其鎮(zhèn)痛效果較差，并且有導(dǎo)致腹膜炎等的副作用，實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)動(dòng)物不人道，在《AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals》中也不推薦使用。
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因此，避免這樣不必要的錯(cuò)誤發(fā)生，了解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)方針很重要，建議做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的同學(xué)先收藏！
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《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理及使用指南》
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是生命科學(xué)研究和發(fā)展重要的基礎(chǔ)和支撐條件, 對(duì)醫(yī)學(xué)發(fā)展和人類健康具有十分重要的意義。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是醫(yī)學(xué)研究不可缺少的重要手段和方法, 但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)不可避免地要給動(dòng)物造成一定程度的恐懼、疼痛甚至需要獻(xiàn)出生命。從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理興起至今, 許多國(guó)家和國(guó)際組織已經(jīng)制定了相應(yīng)的法律、法規(guī)。
如《美國(guó)動(dòng)物福利法》、《英國(guó)動(dòng)物保護(hù)法案》、《德國(guó)動(dòng)物福利法》、《葡萄牙動(dòng)物保護(hù)法》等，其中都涉及了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的保護(hù)，特別是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的麻醉。
本文中用到的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)方針，參考標(biāo)準(zhǔn)就是《美國(guó)動(dòng)物福利法》
參考網(wǎng)站：
https://research.umn.edu/units/iacuc/policies-guidelines/animal-use-guidelines-exceptions#surgery
此指南除了本文說(shuō)到的血液采集/安樂(lè)死/麻醉，還包含鎮(zhèn)痛/手術(shù)/給藥途徑，可以根據(jù)自己的需要去了解更多的標(biāo)準(zhǔn)化操作指南。
《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南》第八版；《AVMA動(dòng)物安樂(lè)死指南》 2020年版，在科研科研三公眾號(hào)，回復(fù)”實(shí)驗(yàn)1859”即可下載！
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一、常見(jiàn)動(dòng)物血液采集指導(dǎo)方針
參考網(wǎng)址：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/blood-collection
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動(dòng)物血液采集指導(dǎo)方針記錄的常見(jiàn)動(dòng)物包括以下：
總結(jié)一下最常用的小鼠、大鼠、兔的血液采集標(biāo)準(zhǔn)。
更加詳細(xì)的步驟以及其它動(dòng)物的血液采集方針指南，可以在上文中的網(wǎng)頁(yè)中瀏覽查看。
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1、小鼠血液采集指導(dǎo)方針
小鼠血液采集指導(dǎo)方針總結(jié)表
2、 大鼠血液采集指導(dǎo)方針
大鼠血液采集方針總結(jié)表
3、兔血液采集指導(dǎo)方針
嚙齒動(dòng)物常見(jiàn)的采血程序介紹
二、安樂(lè)死的指導(dǎo)方針
參考網(wǎng)址：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/euthanasia
安樂(lè)死指導(dǎo)方針記錄的常見(jiàn)動(dòng)物包括以下：
這里也只總結(jié)我們常用的老鼠、老鼠、沙鼠、倉(cāng)鼠或其他小嚙齒動(dòng)物以及兔的安樂(lè)死方式。
其它動(dòng)物的安樂(lè)死指導(dǎo)方針可以以上網(wǎng)頁(yè)查看詳情。
1、老鼠、老鼠、沙鼠、倉(cāng)鼠或其他小嚙齒動(dòng)物安樂(lè)死方式
Carbon dioxide (CO2，二氧化碳)
Inhalation to effect. Flow rate must displace no more than 30% of the chamber volume/minute. Prolonged exposure may be required for neonates and fetuses.
Sodium pentobarbital（戊巴比妥鈉）
≥100 mg/kg intraperitoneal (IP) or intravenous (IV). This is a controlled substance (DEA Schedule II). Dosing is the same for the commercial product Fatal-Plus?.
Euthanasia solution（安樂(lè)死溶液）
≥86 mg/kg IP or IV. Multiple pharmaceutical grade products available. Contains sodium pentobarbital 390 mg/ml + sodium phenytoin 50 mg/ml (dosing based on barbiturate concentration). This is a controlled substance (DEA Schedule III).
Cervical dislocation（頸椎脫位）
Use in conscious small rodents requires demonstrated technical skill (or must be performed only on unconscious/anesthetized small rodents). Use in rats >200 g to be performed under anesthesia only.
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Decapitation（斷頭）
Use in conscious small rodents requires demonstrated technical skill (or must be performed only on unconscious/anesthetized small rodents). Use in rats >200 g to be performed under anesthesia only.
Isoflurane overdose（異氟醚過(guò)量）
Inhalation to effect. May require prolonged exposure to ensure death.
Injectable anesthetic overdose（注射麻醉過(guò)量）
Administration varies (IP or IV). Consult a Research Animal Resources (RAR) veterinarian regarding specific agents.
Anesthesia followed by potassium chloride（麻醉后氯化鉀）
75-150 mg/kg KCl IV. Administer rapidly to effect.
Anesthesia followed by physical method（麻醉后物理方法）
Cervical dislocation, decapitation, exsanguination, bilateral pneumothorax.
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2、兔安樂(lè)死方式
Sodium pentobarbital（戊巴比妥鈉）
≥100 mg/kg IP or IV. This is a controlled substance (DEA Schedule II). Dosing is the same for the commercial product Fatal-Plus?.
Euthanasia solution（安樂(lè)死溶液）
≥86 mg/kg IP or IV. Multiple pharmaceutical grade products available. Contains sodium pentobarbital 390 mg/ml + sodium phenytoin 50 mg/ml (dosing based on barbiturate concentration). This is a controlled substance (DEA Schedule III).
Injectable anesthetic overdose（注射麻醉過(guò)量）
Administration varies (IP or IV). Consult an RAR veterinarian regarding specific agents. Anesthesia followed by potassium chloride（麻醉后氯化鉀）
75-150 mg/kg KCl IV. Administered rapidly to effect.
Anesthesia followed by physical method（麻醉后物理方法）
Cervical dislocation, decapitation, exsanguination, bilateral pneumothorax
三、常見(jiàn)動(dòng)物麻醉的指導(dǎo)方針
參考網(wǎng)站：
https://research.umn.edu/units/rar/guidelines/anesthetic-agents
動(dòng)物麻醉指導(dǎo)方針記錄的常見(jiàn)動(dòng)物包括以下：
總結(jié)一下最常用的小鼠、大鼠的麻醉標(biāo)準(zhǔn)。
更加詳細(xì)的步驟以及其它動(dòng)物的麻醉方針指南，可以在以上網(wǎng)站中瀏覽查看。
1、小鼠
麻醉藥物可以腸胃外或吸入給藥。
麻醉劑的選擇將取決于要執(zhí)行的程序、研究目的和其他因素，例如動(dòng)物年齡;對(duì)新生小鼠有特殊的考慮。
①小鼠麻醉方式
吸入麻醉：
異氟烷是首選吸入麻醉藥物（當(dāng)使用吸入麻醉劑時(shí)，使用煙罩或配備有氣體清除系統(tǒng)的麻醉系統(tǒng)），推薦使用異氟烷的劑量：4-5%用于誘導(dǎo)；1-2%用于維持。
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注射麻醉：（ IP（腹腔注射））
氯胺酮/甲苯噻嗪復(fù)方是小鼠首選的注射麻醉劑。下面列出了其他常用的注射劑。
氯胺酮+賽拉嗪（Rompun?） – 推薦
劑量：氯胺酮：80-120毫克/公斤;甲苯噻嗪： 5-10 毫克/千克
途徑： 腹膜內(nèi) （IP）
持續(xù)時(shí)間： 30-45 分鐘
注： 熱支持至關(guān)重要。如果需要額外的麻醉劑，只需補(bǔ)充 1/3 劑量的氯胺酮。不要重新給藥甲苯噻嗪。甲苯噻嗪可以用阿替帕唑（Antisedan?，1-2mg / kg SQ或IP）或育亨賓（Yobine?，0.5-1mg / kg IP）逆轉(zhuǎn)。
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氯胺酮+地西泮（安定?）
劑量：氯胺酮：100毫克/公斤;地西泮：5毫克/千克
路線：IP
持續(xù)時(shí)間：20-30 分鐘
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局部麻醉：
給藥途徑包括局部注射到粘膜（鼻、眼等），或直接注射到組織和神經(jīng)束周圍。
1）利多卡因：劑量：4mg/kg（0.4ml/kg 1%溶液）；
路線：局部滲透；
注：總劑量不得超過(guò)7mg/kg。起效快，持續(xù)時(shí)間短。
2）布比卡因：劑量：1-2mg/kg（0.4-0.8ml/kg 0.25%溶液）；
路線：局部滲透；
注：總劑量不超過(guò)6mg/kg。起病慢，病程長(zhǎng)。
②新生小鼠麻醉方式
低溫麻醉：
低體溫應(yīng)該只被執(zhí)行在新生兒嚙齒動(dòng)物< 7天,不應(yīng)該用于過(guò)程持續(xù)時(shí)間超過(guò)30分鐘。
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吸入麻醉：
新生嚙齒動(dòng)物的誘導(dǎo)時(shí)間可能比成年嚙齒動(dòng)物吸入麻醉更長(zhǎng)。室中的誘導(dǎo)通常需要5%異氟醚，而維護(hù)（室或鼻錐）需要1-2%（流速=0.5-1L/min）。
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注射麻醉：
氯胺酮/甲苯噻嗪是7天以上小鼠的推薦注射麻醉劑。用27G針I(yè)P注射50-150mg/kg氯胺酮和5-10mg/kg噻嗪(最大體積=0.5ml)。
2、大鼠麻醉方式
吸入麻醉：
異氟烷是首選吸入麻醉藥物， 它有快速和可靠的發(fā)病和恢復(fù)。劑量：4-5%用于誘導(dǎo)；
1-2%用于維持。注釋：500ml容器中300μL用于滴罐麻醉.
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注射麻醉：（ IP（腹腔注射）
1）Ketamine + Xylazine (Rompun?) – recommended（Dose:Ketamine: 40-90 mg/kg +xylazine 5-10 mg/kg；Route: IP；Duration: 45-90 minutes）；（氯胺酮+甲苯噻嗪）
2）Ketamine + diazepam (Valium?)：Dose: Ketamine: 40-80 mg/kg + Diazepam: 5-10mg/kg；Route: IP；Duration: 20-30 minutes（氯胺酮+安定）
3）Pentobarbital (Nembutal?)：Dose: 40-50 mg/kg ；Route: IP；Duration: 80-90 minutes（戊巴比妥）
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局部麻醉：
給藥途徑包括局部注射到粘膜（鼻、眼等），或直接注射到組織和神經(jīng)束周圍。
1）利多卡因：劑量：4mg/kg（0.4ml/kg 1%溶液）；路線：局部滲透；注：總劑量不得超過(guò)7mg/kg。起效快，持續(xù)時(shí)間短。
2）布比卡因：劑量：1-2mg/kg（0.4-0.8ml/kg 0.25%溶液）；路線：局部滲透；注：總劑量不超過(guò)6mg/kg。起病慢，病程長(zhǎng)。
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