Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】
實驗一：細胞增殖分析
1）制備細胞懸液，計數(shù)。
2）在96孔板中接種細胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個重復(fù)。
3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時間（37℃, 5%CO2），細胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細胞，該步驟可以省去。
4）每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。
5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因為細胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話，可以延長培養(yǎng)時間，特別是血液細胞形成的formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6h）。
6）酶標儀測定450nm處的吸光值（OD）。
7）若暫時不測定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室溫下避光保存，這樣可以保證OD值在24h內(nèi)不發(fā)生變化。?