四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)是一種基于大腸桿菌的Tet抗性操縱子所建立的用于誘導(dǎo)基因表達(dá)的調(diào)控系統(tǒng)，也被稱(chēng)作Tet誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。該系統(tǒng)是通過(guò)藥物改變阻遏蛋白的構(gòu)像從而調(diào)控目的蛋白的表達(dá)，詳細(xì)來(lái)說(shuō)，Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）能夠特異性結(jié)合Tet操縱子（Tet operator, TetO），當(dāng)沒(méi)有誘導(dǎo)藥物存在時(shí)，TetR與TetO結(jié)合從而阻斷下游耐藥基因的表達(dá)；當(dāng)有誘導(dǎo)藥物存在時(shí)，藥物使TetR的構(gòu)象發(fā)生改變，從而使其從TetO上脫離下來(lái)，使下游耐藥基因得以表達(dá)，因此細(xì)菌獲得耐藥性。四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)分為激活性系統(tǒng)Tet-on和抑制型系統(tǒng)Tet-off。

激活性系統(tǒng)Tet-on是當(dāng)四環(huán)素不存在時(shí)，下游基因表達(dá)關(guān)閉；當(dāng)四環(huán)素存在時(shí)，下游基因表達(dá)開(kāi)啟。而抑制型系統(tǒng)Tet-off與之正相反，當(dāng)四環(huán)素不存在時(shí)，下游基因表達(dá)；當(dāng)四環(huán)素存在時(shí)，下游基因表達(dá)關(guān)閉。

我們的Tet-On誘導(dǎo)型基因表達(dá)載體旨在——當(dāng)缺乏四環(huán)素時(shí)，實(shí)現(xiàn)目的基因的幾乎或完全沉默；當(dāng)往體系中添加四環(huán)素時(shí)，目的基因得到快速高水平表達(dá)。

優(yōu)勢(shì)：類(lèi)似開(kāi)關(guān)的嚴(yán)格基因表達(dá)調(diào)控：只依賴(lài)rtTA的Tet-on系統(tǒng)在沒(méi)有誘導(dǎo)劑的情況下，會(huì)有明顯的泄露表達(dá)。我們的Tet-On基因表達(dá)載體可嚴(yán)格調(diào)控基因的表達(dá)，在沒(méi)有誘導(dǎo)劑的情況下可將背景泄露表達(dá)最小化，并保持該系統(tǒng)對(duì)四環(huán)素誘導(dǎo)的高靈敏度。外源基因的永久整合：常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染只能實(shí)現(xiàn)外源基因的瞬時(shí)表達(dá)，這種外源基因會(huì)隨著宿主細(xì)胞的分裂而不斷丟失，在快速分裂的細(xì)胞中顯得尤為顯著。相反，將PiggyBac轉(zhuǎn)座子載體和輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，由于轉(zhuǎn)座子在轉(zhuǎn)座酶的作用下，目的基因能穩(wěn)定地整合到宿主細(xì)胞的染色體中，從而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子載體上攜帶的目的基因在宿主細(xì)胞中永久表達(dá)。

技術(shù)簡(jiǎn)單：常規(guī)轉(zhuǎn)染即可把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞，相比起病毒載體需要進(jìn)行病毒包裝，過(guò)程更簡(jiǎn)單。

載體容量非常大：我們的載體總?cè)萘靠蛇_(dá)30 kb，其中質(zhì)粒骨架和Tet-On元件只占4.6 kb，有足夠大的容量可以放置客戶(hù)所感興趣的序列。

四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)因其強(qiáng)大的基因調(diào)控作用受到眾多研究者的青睞，海星生物利用二代Tet-ON 系統(tǒng)，將Tet-on系統(tǒng)與Piggybac轉(zhuǎn)座子載體結(jié)合，推出基于四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)的過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建服務(wù)，在減少泄露的同時(shí)，可實(shí)現(xiàn)大片段的基因組穩(wěn)定整合，表型穩(wěn)定，表達(dá)效率高，省去病毒包裝周期，縮短實(shí)驗(yàn)周期的同時(shí)實(shí)現(xiàn)目的基因的穩(wěn)定開(kāi)合。

技術(shù)流程

案例:?dox誘導(dǎo)后，hKCNH2基因在過(guò)表達(dá)組中的表達(dá)量是對(duì)照組的9602.25倍。

以上內(nèi)容由海星生物提供 （hycyte.com）

我們的服務(wù)：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建/病毒包裝、分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品/突變基因標(biāo)準(zhǔn)品/融合基因標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)/細(xì)胞干擾

我們的產(chǎn)品：HyCyte干細(xì)胞/原代細(xì)胞/細(xì)胞株、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、ClonePlus 專(zhuān)用培養(yǎng)基、基因編輯試盒、病毒現(xiàn)貨、細(xì)胞專(zhuān)用血清