長期以來，腫瘤被認(rèn)為是細(xì)胞失控增生的結(jié)果。

現(xiàn)在研究表明，許多人類惡性腫瘤是其細(xì)胞的死亡過程嚴(yán)重受阻，而使腫瘤細(xì)胞在數(shù)量上無限惡性增生的結(jié)果，這種增殖與死亡的平衡失調(diào)，目前認(rèn)為是由細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)紊亂引起的。

當(dāng)細(xì)胞凋亡受抑，原本在正常監(jiān)控下，應(yīng)被機(jī)體加以清除的惡變細(xì)胞在體內(nèi)不協(xié)調(diào)增殖，從而發(fā)生腫瘤。

現(xiàn)在臨床上常用的腫瘤化療藥物，均能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，它們通過干擾腫瘤細(xì)胞生長、代謝、增殖等過程，最終觸發(fā)腫瘤細(xì)胞程序化死亡通路。

但惡性腫瘤患者接受治療的代價是——免疫力降低、各臟器官損傷、消化道反應(yīng)、骨髓抑制等等不良反應(yīng)。

在抗癌藥物研究中，已經(jīng)被多方證實(shí)的藥用菌菇多糖：具有抗腫瘤﹑免疫調(diào)節(jié)、降血糖﹑抗病毒、抗氧化、抗輻射﹑抗疲勞等生物活性〔1〕。

尤其單一菌菇多糖的抗癌作用已有不少文獻(xiàn)報道，比如唐小平等報道了香菇多糖；馮仲珉等報道了人參粗多糖；李紹平報道了冬蟲夏草多糖的抗腫瘤作用等。

而復(fù)合菌菇多糖的抗癌研究報道，雖然不算很多，但根據(jù)研究結(jié)果來看：

一些多糖復(fù)合作用時，它們之間會相互協(xié)同、相互配伍，發(fā)揮出各自所不具備的其他作用。尤其復(fù)合多糖配伍成合劑，或與藥物結(jié)合，或許可以發(fā)揮協(xié)同作用，使其藥效增倍〔1〕。

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2008年，《中醫(yī)藥導(dǎo)報》中就發(fā)表了一篇：復(fù)合菌菇多糖針對肝癌抗癌作用的實(shí)驗(yàn)研究〔2〕。

研究結(jié)果表明：

復(fù)合菌菇多糖在一定劑量下，不僅可以提高免疫細(xì)胞功能，還會以某種方式“誘騙”癌細(xì)胞凋亡，并對癌細(xì)胞的增殖，有抑制作用。

01

?| 實(shí)驗(yàn)背景 |?

1>腫瘤細(xì)胞株及動物：

人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株 Bel- 7402，購于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心細(xì)胞庫；用RPMI 1640培養(yǎng)液37 ℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；BALB/c裸鼠，雌雄各半，4-6周齡，體重18-22 g。60只，購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心（動物合格證號：0015789）。

2>藥物及試劑：

由香菇多糖、人參粗多糖、冬蟲夏草多糖等組成的復(fù)配多糖試劑。

02

?| 實(shí)驗(yàn)方法?|?

01實(shí)驗(yàn)一：復(fù)合多糖對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株 Bel-7402小鼠細(xì)胞免疫功能的影響 (T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能測定) 。

用BALB/c裸鼠60只，其中50只皮下接種Bel-7402細(xì)胞懸液 (2×107 /mL)0.2 mL，次日隨機(jī)分組 ，稱重編號。

分組如下 ：

復(fù)合多糖高劑量組 (1.5 g/kg)；復(fù)合多糖中劑量組 0.75 g/kg)；復(fù)合多糖低劑量組 (0.25 g/kg)；環(huán)磷酰胺組 (100 mg/kg)；蒸餾水對照組 ；余未接種腫瘤 10只小鼠，作正常對照組。

連續(xù)給藥10 d。

02實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)(MTT法)

將已配置好的細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔190 μL，置37 ℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h后，分別加入對照藥物或?qū)嶒?yàn)藥物（復(fù)合多糖）。

實(shí)驗(yàn)分為：

(1)?實(shí)驗(yàn)組：藥物終濃度40，20，10 mg/L；

(2)?對照組：

A：陰性對照(RPMI 1640培養(yǎng)液)；

B：陽性對照(5-Fu：終濃度 5 mg/L，DDP：終濃度5 mg/L)；

每組設(shè) 6個復(fù)孔。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

03實(shí)驗(yàn)三：細(xì)胞凋亡的檢測

采用Annxein-V-PI雙標(biāo)流式凋亡檢測試劑盒進(jìn)行操作。

Annexin-V-FITC和PI雙陰性為活細(xì)胞，An－nexin-V-FITC陽性而PI陰性為早期凋亡細(xì)胞，An－nexin-V-FITC和PI雙陽性為晚期凋亡細(xì)胞，Annex－in-V-FITC陰性而 PI陽性為壞死細(xì)胞。

03

?|?實(shí)驗(yàn)結(jié)果?|?

實(shí)驗(yàn)一：復(fù)合多糖對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株 Bel-7402小鼠細(xì)胞免疫功能的影響（見表 1、圖1）。

?

表1示，復(fù)合多糖各劑量均可提高 Bel-7402小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，其中 1.5 g/kg組SI值明顯高于蒸餾水對照組 (P<0.01)。

結(jié)果證明：

復(fù)合多糖能提高免疫功能。

實(shí)驗(yàn)二：復(fù)合多糖對Bel-7402細(xì)胞株增殖的影響（見表2、圖2）。

表2示，復(fù)合多糖對Bel-7402細(xì)胞株增殖具有抑制作用。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；復(fù)合多糖10 mg/L，24，48，72 h，細(xì)胞抑制率分別為16.04％，12.84％，2.30％；復(fù)合多糖在低濃度時無細(xì)胞生長抑制作用。

結(jié)果證明：

復(fù)合多糖對癌細(xì)胞的增殖有抑制作用。

但復(fù)合多糖的濃度，直接影響抑制率，

濃度越高，抑制率越高。

實(shí)驗(yàn)三：復(fù)合多糖對Bel-7402細(xì)胞株細(xì)胞凋亡的影響（見表3、圖3）。

?

表3示，Annexin-V/PI雙標(biāo)流式術(shù)檢測不同濃度復(fù)合多糖作用，以及24，48，72 h對細(xì)胞凋亡的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著復(fù)合多糖濃度的增加，Bel-7402細(xì)胞株細(xì)胞凋亡率遞增。同時檢測了復(fù)合多糖作用不同時間后對Bel-7402細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果顯示復(fù)合多糖以時間依賴方式誘導(dǎo)Bel-7402細(xì)胞凋亡。

結(jié)果證明：

復(fù)合多糖可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，且復(fù)合多糖濃度越高，堅(jiān)持采用復(fù)合多糖的時間越久，

癌細(xì)胞的凋亡率也會隨之增加。

▌權(quán)威出處：

〔1〕《上海中醫(yī)藥》雜志2016 年第 50 卷第 3 期；《復(fù)合多糖藥理活性研究進(jìn)展》（楊丹，任謂明，王艷紅，陳 穎，宋欣遙，周秋秋，李月茹）〔2〕《中醫(yī)藥導(dǎo)報》 2008 年12 月?第 14 卷第 14 期；《復(fù)合中藥多糖對人肝癌Bel-7402細(xì)胞株抗癌作用研究》（李白霓，陳偉強(qiáng)，魏鳳香，毛建文，張?jiān)伬颍罴t枝）